公共場(chǎng)所毛巾、床上臥具微生物檢驗方法

中華人民共和國國家標準

公共場(chǎng)所毛巾、床上臥具微生物檢驗方法

細 菌 總 數 測 定

GB/T 18204.4-2000

1 范圍

本標準規定了公共場(chǎng)所毛巾、床上臥具細菌總數的測定方法。

本標準適用于公共場(chǎng)所內公用毛巾、床上臥具細菌總數的測定。

2 引用標準

下列標準所包含的條文，通過(guò)在本標準中引用而構成為本標準的條文。本標準出版時(shí)，所示版本均為有效。所有標準都會(huì )被修訂，使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。

GB /T 18204.2-2000 公共場(chǎng)所茶具微生物檢驗方法細菌總數測定

3 定義

本標準采用下列定義。

細菌總數aerobicbacterialcount

指被檢物品經(jīng)過(guò)采樣處理，在一定條件下培養后(培養基成分、培養溫度、培養時(shí)間、pH值、需氧性質(zhì)等),25 cm²表面上所含菌落的總數。本方法規定的培養條件下所得結果，只包括一群在營(yíng)養瓊脂上生長(cháng)發(fā)育的嗜中溫性需氧菌落總數。

細菌總數主要作為判定公用毛巾、床上臥具被污染程度的標志，檢測細菌總數，為公用毛巾、床上臥具清洗消毒效果的判定和評價(jià)提供依據。

第一法 涂抹法

4 儀器

見(jiàn)GB/T 18204. 2-2000中第4章

5 培養基和試劑

見(jiàn)GB/T 18204.2-2000中第5章。

6 檢驗程序

見(jiàn)GB/T 18204. 2-2000中第6章。

7 操作步驟

7.1 采樣方法

7.1.1 隨機抽取清洗消毒后準備使用的毛巾、床上臥具。

7.1.2 用滅菌生理鹽水濕潤棉拭子，在毛巾、枕巾對折后兩面的中央各25cm²(5cm ×5cm)面積范圍;床單、被單在上下兩部各25cm²面積范圍內有順序地來(lái)回涂抹，用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉拭子放入10mL生理鹽水內，4h內送檢。

7.2 檢驗方法

7.2.1 將放有棉拭子的試管充分振搖。此液為1:10稀釋液。

7.2.2 以無(wú)菌操作，吸取2 mL檢樣，分別注人到兩塊滅菌平皿內，每皿1 mL。如污染嚴重，可十倍遞增稀釋?zhuān)�即吸�?SPAN lang=EN-US>1 mL加到9 mL滅菌生理鹽水中，混勻，此液為1:100稀釋液。每個(gè)稀釋度做兩塊平皿。

7.2.3 將已融化冷至45℃左右的營(yíng)養瓊脂培養基傾入平皿，每皿約15 mL，并立即旋搖平皿。冷凝后放36℃士1℃培養箱培養48 h.

8 菌落計數方法

作平皿菌落計數時(shí)，可用肉眼直接觀(guān)察，必要時(shí)用放大鏡檢查以防遺漏，在記下各平皿的菌落數后，求出同一稀釋度各平皿生長(cháng)的平均菌落數。若平皿中有連成片狀的菌落，該平皿不宜計數;若片狀菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均勻，則可將此半個(gè)平皿菌落計數后乘以2，所得結果代表全皿菌落數。

公用毛巾、床上臥具細菌總數按公式(1)計算:

M=k·n/2

式中:M— 細菌總數，cfu/25

     K— 稀釋倍數;

     n— 平均菌落數。

9 菌落數報告方式

見(jiàn)GB/T 18204. 2-2000中第9章。

第二法戳印法

10 原理

用特制的內徑為3.57cm 的培養皿，注入營(yíng)養瓊脂培養基，使其表面比皿邊高2-3mm。采樣時(shí)將培養基表面和被檢物品表面吻合，輕輕按壓3-4s，使其被檢查物體表面能夠均勻地與培養基表面接觸。然后蓋上皿蓋，置恒溫箱37℃培養24 h后，計數培養基表面(10cm,)生長(cháng)的細菌菌落數。

11 培養基和試劑

11.1營(yíng)養瓊脂培養基

11.1.1成 分:蛋白胨   10g

            牛肉膏   3 g

            氯化鈉   5 g

            瓊脂     15-20g

            蒸餾水  1000 mL

11.1.2 制法:將上述成分混合后，加熱溶解，調pH為7.4-7.6 ，過(guò)濾、分裝于玻璃容器中，經(jīng)121℃滅菌20 min，儲存于冷暗處備用。

12 儀器

12.1 高壓蒸汽滅菌器

12.2 干熱滅菌器

12.3 恒溫箱。

12.4 冰箱。

12.5 特制戳印平皿(內徑3.57cm),

12.6 制備培養基用的一般器材。

13 檢驗步驟

13.1 將溶化并冷至50-55℃的營(yíng)養瓊脂培養基，傾注于已滅菌的特制戳印平皿內(使皿內部培養基平面比皿邊緣高2-3 mm)，每皿約10 mL，待凝固后，蓋上皿蓋(皿蓋與培養基隔一定空間)，翻轉平皿，在4℃下保存備用。

13.2 將被檢物品放平，再將皿蓋打開(kāi)，放在被檢物品表面上，用手輕輕按壓3-4s，取下，蓋上皿蓋，置37℃恒溫箱內，培養24 h后觀(guān)察結果，計數細菌菌落數。

14 結果計算

用肉眼觀(guān)察，點(diǎn)數培養基表面菌落數，其細菌總數為10cm,(每皿)表面積的菌落數。本法簡(jiǎn) 便易行、可靠，可直接采樣做細菌培養。

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