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附錄A
技術(shù)要求
（規范性附錄）
疫苗制作技術(shù)要求如表A.1所示。表A.1 技術(shù)要求
|
序號 |
項目名稱(chēng) |
技術(shù)指標 | |
|
1 |
滅菌要求 |
溫度 |
(121～125)℃ |
|
壓力 |
0.11MPa | ||
|
時(shí)間 |
30min | ||
|
2 |
培養條件 |
溫度 |
|
|
壓力 |
0.05MPa | ||
|
通氣量 |
1∶1［每分鐘進(jìn)出空氣（體積比）］ | ||
|
3 |
滅活方法 |
福爾馬林 |
最終濃度為0.15% |
|
①溫度與滅活時(shí)間 |
| ||
|
②溫度與滅活時(shí)間 |
| ||
|
4 |
產(chǎn)品標準 |
含菌量 |
≥10×108 CFU /ml |
|
pH值 |
7.0～7.5 | ||
|
純度 |
無(wú)活菌、無(wú)雜菌污染。 | ||
附錄B
麥氏比濁管使用說(shuō)明
（規范性附錄）
B.1 麥氏比濁管標準見(jiàn)表B.1。
B.1 麥氏比濁管標準
|
管 號(McFarland) |
0.5 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
0.25%BaCl2（ml） |
0.2 |
0.4 |
0.8 |
1.2 |
1.6 |
2.0 |
|
1%H2SO4(ml) |
9.8 |
9.6 |
9.2 |
8.8 |
8.4 |
8.0 |
|
細菌的近似濃度(×108/ml) |
1 |
3 |
6 |
9 |
12 |
15 |
|
細菌的近似濃度(百萬(wàn)/ml) |
100 |
300 |
600 |
900 |
1200 |
1500 |
B.2 使用方法
輕搖標準試管。無(wú)菌操作將被測定的發(fā)酵液加到與標準管相同直徑（大�。┑臒o(wú)菌試管中。
以無(wú)菌操作向被測定試管加入生理鹽水（氯化鈉），直到濃度與所要求的標準管的濃度相同。
B.3 計算被測試管菌液的濃度
第2個(gè)標準管為3CFU/ml的倍數。細菌濃度標準管號×3×108=該管號的cfu/ml。如：3號管（#3）為9 ×108 CFU /ml。
B.4 注意事項
B.4.1 如果測定的發(fā)酵液不澄清，由發(fā)酵液的值減去未接種培養基的值來(lái)校正細菌濃度。如：4號管(發(fā)酵液)-1號管(孵育過(guò)的未接種的肉湯管)=3號管(校正讀數)
B.4.2 如果被測定試管細菌濃度超過(guò)15×108 CFU/ml，可采用倍比稀釋法稀釋后，再進(jìn)行比濁。
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