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一、目的
掌握水中細菌總數的監測方法和衛生學(xué)意義
國家標準規定的細菌總數監測方法為：標準平板計數法
一、原理
細菌總數系指
二、儀器設備及共用器材和試劑
1.高壓蒸汽滅菌器；2.電熱干燥箱；3.恒溫培養箱；4.電冰箱；5.電熱恒溫水浴鍋；6.電爐；7.放大鏡；8.滅菌鑷子；9.酒精燈：每組1只；10.滅菌棉球；11.營(yíng)養瓊脂；12.記號筆
三、材料和試劑
毫升無(wú)菌吸管一支；2.滅菌平皿3個(gè)；3.無(wú)菌采樣瓶（管）1個(gè)
四、采樣及樣品處理
1. 采樣容器必須先進(jìn)行滅菌，并保證在運送、保存過(guò)程中不受污染。
2. 采自來(lái)水水樣時(shí)，先用酒精燈將水籠頭燒灼消毒，然后將水籠頭完全打開(kāi)，放水5-10分鐘后采樣，經(jīng)常用的水籠頭放水1-3分鐘即可。
3. 采水源水時(shí)，應選擇有代表性的地點(diǎn)及水質(zhì)可疑的地方，一般應距水面0.2
4. 采集含有余氯的水樣時(shí)，應在采樣瓶中加入無(wú)菌的1.5%硫代硫酸鈉溶液以中和水中余氯的殺菌作用，按每500毫升水樣加2毫升計算。
5. 采樣量應為瓶容量的80%，以便在檢驗時(shí)搖動(dòng)。
6. 采集水樣后應立即記錄水樣名稱(chēng)、地點(diǎn)、時(shí)間等項目，并應盡快檢驗，一般不超過(guò)2小時(shí)，放冰箱中保存也不應超過(guò)4小時(shí)。
五、操作方法
1. 將采樣管（瓶）用力振蕩80次，使可能存在的細菌充分分散開(kāi)。
2. 用1毫升滅菌吸管吸取管內液（1:10稀釋?zhuān)?SPAN lang=EN-US>1毫升，放入含9毫升生理鹽水管中（1:100稀釋?zhuān)�，振�?SPAN lang=EN-US>10次或吹打混勻
3. 用另一支1毫升滅菌吸管吸取管內液（1:100稀釋?zhuān)?SPAN lang=EN-US>1毫升，放入含9毫升生理鹽水管中（1:1000稀釋?zhuān)�，振�?SPAN lang=EN-US>10次或吹打混勻，余此類(lèi)推。
4. 用同一支吸管從高稀釋度管開(kāi)始分別吸取1毫升放入一個(gè)無(wú)菌平皿內，每個(gè)樣品作兩個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿為平行樣。
5. 于每個(gè)平皿中傾注15毫升左右已經(jīng)融化并冷卻到
6. 待瓊脂冷卻凝固后，翻轉平皿，使底面朝上，置
六、注意事項
1. 全部操作過(guò)程必須無(wú)菌。
2. 采集的樣品應根據可能的細菌污染程度進(jìn)行倍比稀釋?zhuān)⑦x擇兩個(gè)最適稀釋度檢驗。如自來(lái)水以檢測原倍水樣為宜，一般的物體表面以1:10和1:100稀釋較為合適，而化妝品應進(jìn)行1:1000稀釋?zhuān)⒀b鮮牛奶以1:10000為宜。
3. 營(yíng)養瓊脂的溫度不能過(guò)高和過(guò)低，而且必須與樣品充分混勻。
七、菌落計數及報告方式
平皿菌落計數可用肉眼觀(guān)察，必要時(shí)用放大鏡觀(guān)察，注意菌落與雜質(zhì)的區別。
1. 計算同一稀釋度的平均菌落數，若其中一個(gè)平皿內有較大片狀菌落生長(cháng)則不計該平皿；若片狀生長(cháng)的菌落未超過(guò)平皿的一半時(shí)可按菌落分布均勻的另一半平皿菌落數×2計算。
2. 先計算平均菌落數在30-300之間的平皿，如只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數在此范圍，則以該平均菌落數乘以其稀釋倍數報告。若有2個(gè)稀釋度的菌落數在此范圍，則應按二者的比值來(lái)決定，若比值≤2則報告兩者的平均數，比值＞2則報告其中較小稀釋度的菌落數。
3. 如所有稀釋度的菌落數均＞300，則報告最高稀釋度的平均菌落數乘以其稀釋度。
4. 如所有稀釋度的菌落數均＜30，則應以稀釋度最低的平均菌落數乘以其稀釋度報告。
5. 如所有稀釋度的平均菌落數均不在30-300之間，應以最接近30或300的菌落數乘以其稀釋倍數報告。
6. 菌落計數的報告，100以?xún)葧r(shí)按實(shí)際數報告，＞100時(shí)采用二位有效數字的以10的指數形式表示。
7. 如菌落難以計數則應報告“無(wú)法計數”并注明稀釋倍數。
八、結果計算
CFU/毫升或克＝平均菌落數×稀釋倍數
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