非發(fā)酵革蘭氏陰性桿菌——軍團菌屬

1．細菌特性

（1）形態(tài)染色  革蘭陰性桿菌，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，有端鞭毛或側鞭毛，動(dòng)力陽(yáng)性。

（2）培養特性  能在細胞內生長(cháng)繁殖，專(zhuān)性需氧，同時(shí)生長(cháng)環(huán)境中還需2.5%~5%的二氧化碳；其生長(cháng)的pH范圍較窄，最適pH6.4~7.2，在pH1.7時(shí)則死亡；最適生長(cháng)溫度35℃，可生長(cháng)的溫度范圍為25℃~42℃，在外環(huán)境中甚至水溫達63℃時(shí)亦可分離到本菌；營(yíng)養要求苛刻，普通培養基、血平板和巧克力平板均不生長(cháng)，生長(cháng)過(guò)程中需要多種微量元素作為酶的協(xié)同因子或在代謝中起重要作用，同時(shí)需要氨基酸，以甲硫氨酸和半胱氨酸最為重要。生長(cháng)緩慢，固體培養基在培養48h左右，在濃密涂種處可見(jiàn)生長(cháng)。

不同培養基上菌落的形成和表現不同，目前公認的最適宜培養基是緩沖活性炭酵母浸出液，加上鐵、L-半胱氨酸和α-酮戊二酸（在不含L-半胱氨酸的BCYE和血平板上不生長(cháng)），稱(chēng)之為BCYEa（buffered charcoal-yeast extract agar）培養基。

（3）生化反應  生化反應可作為鑒定時(shí)的參考，大多數菌種能產(chǎn)生β內酰胺酶和液化明膠、水解淀粉，觸酶陽(yáng)性，氧化酶弱陽(yáng)性；硝酸鹽還原、尿素酶和碳水化合物利用反應都是陰性；所有嗜肺軍團菌血清型（血清型4和15除外）的各個(gè)菌株均具有極強的水解馬尿酸鹽的作用，而其他軍團菌則陰性。

（4）抵抗力  軍團菌已成為天然水環(huán)境中常在的一大類(lèi)菌群，嗜肺軍團菌的生存能力較強，在含有藻類(lèi)物質(zhì)的氣溶膠中可長(cháng)期存活，對紫外線(xiàn)敏感，對熱和常用的化學(xué)消毒劑敏感。

2．臨床意義

軍團病在世界各地均有發(fā)病，但主要在經(jīng)濟發(fā)達國家流行，國內多屬散發(fā)報道。本菌廣泛存在于土壤及自然和人工的水環(huán)境中，尤其是在空調冷凝水中的檢出率最高。大多數病例（85%）是嗜肺軍團菌引起的，其中嗜肺軍團菌1血清型和6血清型占75%。高發(fā)于夏秋季，細菌通過(guò)空氣傳播，易侵犯患有慢性器質(zhì)性疾病或免疫功能低下的患者，最常見(jiàn)的是肺炎型。

3．微生物學(xué)檢驗

（1）檢驗程序  。

（2）標本采集  標本應小心收集避免氣溶膠的形成，最好于收集后兩小時(shí)內用無(wú)菌防漏容器在環(huán)境溫度下小心送到實(shí)驗室。

1）適用的標本主要包括  咳出的痰、用支氣管鏡收集的材料、經(jīng)氣管吸出物、胸腔積液和血液等。除胸水和血液外，其他標本中均混有正常菌群及其他病原菌，正常菌群對軍團菌有殺滅作用，取材后應及時(shí)分離培養，并使用加抗生素的選擇培養基。

2）病理組織標本  如閉合或開(kāi)放的肺活檢材料、尸體標本及實(shí)驗動(dòng)物的肝、脾等標本必須制成懸液，再進(jìn)行涂片和分離培養。

3）環(huán)境污染標本  如水、土壤等，水標本應先濃縮再接種，土壤標本加入水中振蕩30min取水樣，參照水標本處理。

（3）檢驗方法

1）顯微鏡檢查  標本直接涂片革蘭染色，意義不大。

2）分離培養  本菌營(yíng)養要求苛刻，生長(cháng)緩慢，在35℃～37℃，相對濕度70%～80%，2.5%～5.0%CO2環(huán)境下，BCYE培養基上培養2～5d可形成直徑1～2mm有光澤的菌落，在F-G(Feeley-Garman)瓊脂培養基上，培養3～5d可見(jiàn)針尖大小的菌落，在紫外線(xiàn)照射下可產(chǎn)生熒光。標本如在血平板、巧克力平板上生長(cháng)或在BCYE或F-G平板上24h生長(cháng)，則不是軍團菌。臨床標本如有污染，可在培養基中加入對軍團菌無(wú)抑制作用的抗生素如頭孢噻吩4μg/ml、多粘菌素E16U/ml、萬(wàn)古霉素0.5μg/ml、放線(xiàn)菌酮80μg/ml。

3）鑒定  在血平板、巧克力平板及不含L半胱氨酸的BCYE平板上不生長(cháng)，而在含有L半胱氨酸的BCYE和F-G培養基上生長(cháng)緩慢、形成典型菌落；革蘭陰性小桿菌，有顯著(zhù)的多形性，均應懷疑為軍團菌。對可疑菌株可作直接熒光抗體染色等血清學(xué)鑒定和生化反應，必要時(shí)作細菌脂肪酸的氣液相色譜分析和DNA雜交、PCR試驗。

4）免疫學(xué)檢測  檢測軍團菌血清抗體的方法主要有間接免疫熒光染色（IFA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）及放射免疫測定等，其中以IFA在臨床應用最多。急性期和恢復期雙份血清抗體效價(jià)增加4倍以上并達≥1:128或單份血清抗體效價(jià)達到或超過(guò)1:256為陽(yáng)性。本法取恢復期血清需時(shí)較久（1～3個(gè)月），且可能與其他細菌的抗體起交叉反應。

5）核酸檢測  是快速特異方法，常用DNA探針和PCR方法檢測軍團菌rRNA，可用于軍團菌的快速診斷。

（4）耐藥性 軍團菌體外抗生素敏感性試驗尚無(wú)統一標準，且與臨床治療反應不一致，因此，并不主張對醫院診斷實(shí)驗室分離的軍團菌進(jìn)行體外抗生素敏感性試驗。目前已取得明顯臨床效果的抗菌藥物主要是大環(huán)內酯類(lèi)藥物、利福平、氟喹諾酮類(lèi)藥物，其次是四環(huán)素類(lèi)。青霉素、頭孢菌素、氨基糖苷類(lèi)抗生素治療本菌無(wú)效。

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