沙門(mén)氏菌檢驗（1）

檢驗步驟
　　1. 前增菌和增菌。凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品均應經(jīng)過(guò)前增菌，各稱(chēng)取檢樣25g，加在裝有225mL緩沖蛋白胨水的500mL廣口瓶?jì)�。固體食品可先應用均質(zhì)器，以8000~10000r/min打碎1min，或用乳缽加滅菌砂磨碎；粉狀食品用滅菌匙或玻棒研磨使乳化，于36±1℃培養4h（干蛋品需培養18~24h），移取10mL，轉種于100mL氯化鎂孔雀綠增菌液或四硫磺酸鈉煌綠增菌液內，于42℃培養18~24h。同時(shí)另取10mL，加入于100mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內，于36±1℃培養18~24h。
鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經(jīng)加工的食品不必經(jīng)過(guò)前增菌。各取25g（25mL），加入滅菌生理鹽水25mL，按前法做成檢樣勻液，取其半量接種于100mL氯化鎂孔雀綠增菌液或四硫磺酸鈉煌綠增菌液內，于42℃培養24h；另半量接種于100mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內，于36±1℃培養18~24h。
    2. 分離。取增菌液1環(huán)，劃線(xiàn)接種于亞硫酸鉍瓊脂平板和DHL瓊脂平板（或HE、WS、SS瓊脂平板）各一個(gè)。于36±1℃分別培養18~24h（DHL、HE、WS、SS）或40~48h（BS）。觀(guān)察各個(gè)平板上生長(cháng)的菌落。其菌落特征見(jiàn)表3-1。
挑取選擇性瓊脂平板上的可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂斜面，一般應多挑幾個(gè)菌落，以防遺漏，沙門(mén)氏菌在三糖鐵瓊脂上與腸桿菌科各屬可疑反應的鑒別見(jiàn)表3~2。
    3. 生化學(xué)鑒定。在接種三糖鐵瓊脂的同時(shí)，再接種蛋白胨水（供靛基質(zhì)試驗用），尿素瓊脂（pH7.2）、氰化鉀（KCN）培養基和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗培養基及對照培養基各一管，于36±1℃培養18~24h，必要時(shí)可延長(cháng)至48h，按表3判定結果，如遇有非典型菌株，可根據情況補做有關(guān)生物化學(xué)試驗，必要時(shí)進(jìn)行各亞屬的鑒定。
    4. 血清學(xué)分型。一般采用1.5％瓊脂斜面培養物做玻片凝集試驗。
（1）O抗原的鑒定：首選用A~F多價(jià)血清做玻片凝集試驗，同時(shí)用生理鹽水作對照，生理鹽水自凝者不能分型。凡A~F多價(jià)血清呈現凝集者，可依次用Ｏ因子血清進(jìn)行凝集試驗，根據結果判定Ｏ群。如不被A~F多價(jià)Ｏ血清凝集者，可用57種或163種沙門(mén)氏菌因子血清中的7種多價(jià)血清檢查，如有其中一種血清凝集，則用這種血清包括的Ｏ群血清逐一檢查，以確定Ｏ群。如果由于Vi抗原存在而阻止Ｏ凝集時(shí)，可將菌苔用生理鹽水作成濃菌液煮沸后再檢查。
（2）H抗原的鑒定。根據所確定的Ｏ群，依次用H因子血清檢查1相和2相的H抗原，對不常見(jiàn)的菌型，可先用多價(jià)H血清檢查，如其中某種多價(jià)血清凝集時(shí)，則再用此血清所包括的H因子血清逐一檢查，以確定第1相和第2相的H抗原，如無(wú)單因子血清時(shí)，要用兩個(gè)H復合因子血清核對其檢查的結果。如僅檢出第1相或第2相時(shí)，可在瓊脂斜面上移種1~2代后再檢查，若仍為一相，要用位相變異的方法檢查其另一相H抗原。
常用的位相變異試驗方法如下：
小套管法：將兩端開(kāi)口的小玻管（下端開(kāi)口要留一缺口，不要平齊）放在半固體管內，小玻管的上端應高出培養基的表面，滅菌備用。溶化瓊脂冷至50℃時(shí)，挑取已知H因子血清1環(huán)，加入套管中的瓊脂表面，于37℃培養，每日觀(guān)察，另一相解離后可由套管外的半固體表面取菌檢查。
U型管法：向0.4％瓊脂培養基中加入適量血清，裝入滅菌U形管內，管口塞棉塞，凝固后由一端接種細菌，經(jīng)培養再由另一端取菌檢查。
簡(jiǎn)易平板法：將0.7％~0.8％半固體瓊脂平板烘干表面水分，挑取因子血清1環(huán)，滴在半固體平板表面，放置片刻，待血清吸收到瓊脂內，在血清部位的中央點(diǎn)種待檢細菌，培養后，在形成蔓延生長(cháng)的菌苔邊緣取菌檢查。
（3）Vi抗原的鑒定：用Vi因子血清檢查。已知具有Vi抗原的菌型有傷寒沙門(mén)氏菌，丙型副傷寒沙門(mén)氏菌，都柏林沙門(mén)氏菌。
5. 菌型的判定和結果報告。綜合以上生化試驗和血清學(xué)分型鑒別的結果，按照沙門(mén)氏菌屬抗原表判定菌型，并報告結果。

 

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