3種弧菌選擇性培養基對霍亂弧菌鑒定結果的影響

摘要： [目的] 選擇一種較實(shí)用的霍亂弧菌分離培養基。

          [方法] 對3種常用的霍亂弧菌選擇性培養基，分別接種 O139群、稻葉型和小川型 霍亂弧菌。將其培養物做玻片血清凝集試驗、氧化酶試驗和粘絲試驗。觀(guān)察試驗結果。

          [結果]  4號瓊脂較慶大霉素瓊脂和TCBS瓊脂在玻片血清凝集、氧化酶試驗、 粘絲試驗中受培養基成份影響較小 。

         [結論 ]提示4號瓊脂為基層化驗室首選霍亂弧菌選擇性培養基 。 

 

 

4號瓊脂、慶大霉素瓊脂和 TCBS瓊脂是霍亂弧菌分離鑒定中常用的3種強選擇性培養基。由于培養基成份的差異，代謝產(chǎn)物也有所不同，而某些培養基成份及其代謝產(chǎn)物會(huì )直接 影響霍亂弧菌生化鑒定項目的試驗結果 。為此我們選擇小川型，稻葉型 、 O139群霍亂弧 菌進(jìn)行比較試驗，結果報告如下 。 

1 材料與方法

1.1 菌株 小川型、稻葉型、Ol39群霍亂弧菌均為本實(shí)驗室確診菌株 。 

1.2 培養基  4號瓊脂3種，分別購自北京陸橋技術(shù)有限公司，批號： 990526；廣東環(huán)凱微生物科技公司，1999年產(chǎn)；杭州天和微生物試劑有限公司．批號：20000404。慶大瓊脂由預防醫學(xué)科學(xué)院流行病微生物學(xué)研究所提供，批號：990706 。TCBS瓊脂2種，分別購自北京陸橋技術(shù)有限公司，批號：001031；杭州天和微生物試劑有限公司，生產(chǎn)日期：1999年9月7日。各合成培養基不另加抗菌素或抑菌劑，培養基無(wú)潮解結塊現象。

1.3 診斷血清與試劑    診斷血清由中國藥品檢定所生產(chǎn)，有效期內使用。氧化酶試劑、粘 絲試驗試劑由實(shí)驗室自制。并經(jīng)陽(yáng)性、陰性菌株對照。

1.4 方法 將3種菌株分別接種待檢培養基，每組各接種2個(gè)平板，培養1 8～24 h，取培養物進(jìn)行試驗。玻片血清凝集參照《霍亂防治手冊》；氧化酶試驗：取白色濾紙條，滴1%鹽酸二甲基對苯二胺試劑少許，直接蘸取選擇性培養基上的被檢菌，陽(yáng)性者顏色由淺紅變淡紫到深紫。粘絲試驗：在平皿上滴1大滴0.5去氧膽酸鈉水溶液，從待測培養基上挑取新鮮培 養物研磨混勻，陽(yáng)性者1min內由混變清并變得粘稠，用接種環(huán)挑取時(shí),可以拉出細絲，每次試驗均多次重復證實(shí), 并設陽(yáng)性、陰性對照。 

2 結果

2.1  玻片血清凝集    4號瓊脂，慶大瓊脂的培養物玻片血清凝集良好，TCBS瓊脂的培養物偶爾玻片血清凝集不良，甚至出現不凝集(表1) 。

表 1   不同弧菌選擇性培養基在霍亂弧菌鑒定項目中的試驗結果

注 ： “ +++ ” 為強陽(yáng)性 ，“+ +”陽(yáng)性，“+／—”為陰陽(yáng)性不確定，“—”陰性。 

2.2  氧化酶試驗   陸橋和杭州產(chǎn)4號瓊脂霍亂弧菌培養物的氧化酶試驗最為理想，廣東4號次之。慶大和TCBS試驗結果大多為陰性，且與菌型相關(guān)(表 1) 。 

2.3  粘絲試驗  3種4號平板培養物和流研所慶大結果為陽(yáng)性，慶大與TCBS瓊脂粘絲試驗結果陰性陽(yáng)性 均有出現，并與菌型相關(guān) (表1 ) 。 

3 討論

霍亂是急性腸道傳染病，以發(fā)病急、傳播快、波及范圍廣而受到極大重視�？s短霍亂弧菌的實(shí)驗室診 斷時(shí)間有助于臨床病例的治療和流行病學(xué)調查等防治工作的進(jìn)行。雖然目前國內對霍亂弧菌的鑒定有許多快速輔助方法，但由于其特定的適用范圍和診斷意義的限制，常規的分離培養鑒定仍然是目前實(shí)驗室最常用和經(jīng)典的方法。在規范的實(shí)驗步驟中。 氧化酶試驗、粘絲試驗，甚至玻片血清凝集均需從強選擇性培養基中挑取可疑菌落重新接種營(yíng)養瓊脂等不含特殊成份的培養基再次培養后，試驗結果方能可靠。但為了早出實(shí)驗結果，實(shí)際操作中實(shí)驗人員都希望能從初次強選擇性培養基的可疑培養物中盡早做出準確判斷。而氧化酶試驗、粘絲試驗和玻片血清凝集是霍亂弧菌鑒定中十分重要的3個(gè)生化項目。其試驗結果的準確將直接決定對鑒定菌株的判定，因此挑選1種能夠直接同時(shí)做玻片血清凝集、氧化酶試驗、粘絲試驗的強選擇性培養基做霍亂弧菌的分離鑒定，在實(shí)際工作中具有一定的意義�；�于此目的。筆者對最常用的3種 弧菌強選擇性培養基進(jìn)行比較試驗，試驗結果可見(jiàn)。4號瓊脂培養物的玻片血清凝集、氧化酶試驗和粘絲試驗受培養基成份干擾作用小，結果基本準確；慶大瓊脂的氧化酶試驗和粘絲試驗在不同程度上都受培養基成份干擾，其試驗結果準確性不高 ；TCBS瓊脂培養物各個(gè)項目受培養基成份影響較大，某些 O139菌株在TCBS瓊脂上培養18 h出現大量綠色菌落，易造成漏檢或誤診，玻片血清凝集偶爾出現不凝集現象．其 氧化酶試驗和粘絲試驗又不夠可靠，因而在實(shí)際工作中要特別引起注意。

本次試驗結果不足之處是使用的培養基廠(chǎng)家數量和受試菌株數有限，而且對以上干擾成份的判定也 需要做更進(jìn)一步細致的比較試驗。只有判定出影響物質(zhì)，才有利于今后選擇性培養基成份的改進(jìn)。但其結 果依然可以提示4號瓊脂可作為基層化驗室首選的霍亂弧菌選擇培養基 。