4 種測定化妝品菌落總數培養基的質(zhì)量比較

隨著(zhù)化妝品使用越來(lái)越廣泛。已成為人們日常生活中的必需品。開(kāi)展化妝品衛生質(zhì)量監測。是保障人民健康維護消費者的利益，如使用了細菌總數超標的化妝品。會(huì )導致皮膚感染 。因此，化妝品細菌總數測定是便于判明樣品被污染的程度。是對樣品進(jìn)行衛生學(xué)評價(jià)的重要依據 。按國家衛生部頒布《化妝品衛生規范》，卵磷脂、吐溫 8 0營(yíng)養瓊脂培養基是用于測定化妝品菌落總數的培養基。

現在生產(chǎn)培養基的廠(chǎng)家很多，為了解不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的卵磷脂、吐溫8 0營(yíng)養瓊脂培養基 質(zhì)量，對 4種培養基進(jìn)行比較 �，F將結果報告如下 。 

1 材料與方法

1.1實(shí)驗菌株

大腸埃希菌 ( ATCC  25922 )，金黃色葡萄球菌 ( ATCC 6538) 。 

1.2 培養基

卵磷脂、吐溫80營(yíng)養瓊脂培養基分別購自杭州天和微生物試劑有限公司．北京陸橋技術(shù)有限責任公司 ．廣東環(huán)凱微生物科技有限公司等3種干燥培養基，編號為1、2、3號 ，干燥培養基按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)配制，均在有效期內使用。自配卵磷脂、吐溫8 0營(yíng)養瓊脂培養基，由本實(shí)驗室參照文獻方法配制。其蛋白胨采用日本進(jìn)口材料，自配培養基編號為4號，共4種卵磷脂、吐溫 8 0營(yíng)養瓊脂培養基。 

1.3試劑

0.5％氯化三苯四氮唑 (TTC ) 121℃ 2 0min高壓滅菌，備用。 

1.4實(shí)驗方法

1.4.1菌液的準備

取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌分別接種營(yíng)養肉湯管。在37 ℃培 養 1 8 ～ 2 4 h。 

1.4.2稀釋培養基并接種

將培養好的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌兩種肉湯管用生理鹽水10倍稀釋 ，從10^-1到l 0^-7。選用平板上菌落數在5 0～1 0 0 c f u之間的稀釋度，然后取稀釋好菌懸液 1ml置入無(wú)菌平 皿，傾注加入0.5％TTC的卵磷脂、吐溫8 0營(yíng)養瓊脂，每個(gè)平板1 5-2 0ml ，每種培養基接種3個(gè)平板。待凝固后將平板翻轉置 3 7 ℃培養 4 8 h取出觀(guān)察結果．并以每種培養基的 3個(gè)平板菌落平均數為各檢測數進(jìn)行比較，試驗重復5次。 

1.4.3實(shí)驗室室內質(zhì)量控制  用菌落計數方法，取大腸埃希菌肉湯培養管用生理鹽水10倍稀 釋?zhuān)瑥?10^-1到10^-7，吸取10菌懸液1ml注入無(wú)菌平板。共接種3個(gè)平板，然后將已溶解的營(yíng)養瓊脂傾注平板 �；靹�，待凝固置37℃培養48 h后作菌落計數，連續進(jìn)行10次。將所得結果標入質(zhì)量控制圖。 

2   結 果

2.1  4種培養基大腸埃希菌的計數比較

4種培養基對大腸埃希菌進(jìn)行5次菌落計數重復試驗，結果顯示各種培養基的菌落大小與數量基本一致．差異無(wú)統計學(xué)意義 ( F=0.257，P>0.05) 。見(jiàn)表 1 。 

 

 

2.2   4種培養基對金黃色葡萄球菌細菌總數計數

連續進(jìn)行5次實(shí)驗，結果顯示各種培養基的菌落大小與數量基本一致，差異無(wú)統計學(xué)意義 ( F= 0.066，P>0.05 )： 見(jiàn)表 2 。 

表 2   4種培養基金黃色葡萄球菌生長(cháng)菌落數比較

2.3實(shí)驗室室內質(zhì)量控制

連續 1 0次菌落計數，測定值在 4.3×106—9.66×10⁶之間，平均值為6.94×10⁶cf u／ml 。s=1.74×10⁶cf u／ml 。1 0次測定值均在`x±2 s范 圍 內 ，達到實(shí)驗室內部控制標準要求。 

3   討 論

實(shí)驗表明，在4種不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的卵磷脂、吐溫 80營(yíng)養瓊脂培養基上，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的生長(cháng)速度、菌落形態(tài)與數量無(wú)明顯差別 ，各種培養基的軟硬度、pH值等理化指標符合質(zhì)量要求，差異無(wú)統計學(xué)意義。但在透明度上自配的卵磷脂、吐溫80營(yíng)養瓊脂培養基較其他3種干燥培養基清晰透明，而3種干燥培養基配制的平板較混濁可能是由于培養基的原材料不同的關(guān)系。自配培養基用的是日本進(jìn)口蛋白胨，其顏色偏淺 。蛋白胨是由蛋白質(zhì) (如酪蛋白、纖維蛋白)經(jīng)酶或酸堿分解而成。由于蛋白質(zhì)的來(lái)源和消化程度不同，因而制得的胨質(zhì)量相差很大，就是同一廠(chǎng)家不同批號的蛋白胨質(zhì)量也會(huì )有差異，所以是否這樣配制出來(lái)的培養基的透明度就有所不同。實(shí)驗室室內質(zhì)量控制是保證實(shí)驗室檢驗結果準確 性的必要基礎。為確保本次實(shí)驗結果的準確性與可靠性，我們對實(shí)驗結果進(jìn)行控制，繪制質(zhì)量控制圖 ，結果顯示，l 0次菌落總數測定值在4.3×10⁶—9.66×10⁶之間，均在允許誤差范圍，實(shí)驗結果在`x±2 s之內 ，未發(fā)現失控現象，從實(shí)驗穩定、重復性好 ，表明本次培養基的實(shí)驗結果是可信的 。 

近年，干燥培養基使用越來(lái)越廣泛，培養基的質(zhì)量關(guān)系到微生物實(shí)驗室檢測工作的成效 。因此 ，開(kāi)展微生物培養基的質(zhì)控工作十分必要。 目前，我國生產(chǎn)培養基的廠(chǎng)家很多，然而各廠(chǎng)家配制培養基的所采用配方有不同 ，有國家標準， 或是行業(yè)標準 。在制做方法上也各有異。如這次實(shí)驗用的卵磷脂 、吐溫 8 0營(yíng)養瓊脂培養基里的吐溫8 0試劑 ，有些廠(chǎng)家 產(chǎn)品是在使用該培養基時(shí)才加吐溫8 0。還有4號瓊脂培養基，有些廠(chǎng)家生產(chǎn)干燥培養基是在制備4號瓊脂平板時(shí)加入亞碲酸鉀及慶大霉素，而有的廠(chǎng)家將亞碲酸鉀、慶大霉素已經(jīng)加進(jìn)干燥培養基里，兩種方法配制出來(lái)的4號瓊脂平板顏色就不一樣�，F在的商品培養基還存在一些問(wèn)題，如培養基包裝不規范，沒(méi)有標明生產(chǎn)日期及有效期限，包裝標簽說(shuō)明沒(méi)列出培養基的配方，還有的產(chǎn)品質(zhì)檢報告不規范等，干燥培養基的生產(chǎn)由于原料來(lái)源不同容易出現這樣或那樣的問(wèn)題。因此．商品培養基的生產(chǎn)質(zhì)量要提高，不斷完善，要更加規范化、標準化 。據文獻介紹，實(shí)驗室不得使用不符合要求的培養基。所以 ，在購買(mǎi)干燥培養基時(shí) ，應選擇技術(shù)力量強、性能穩定、通過(guò)質(zhì)量管理體系認證企業(yè)的產(chǎn)品，而且不要經(jīng)常更換廠(chǎng)家生產(chǎn)，以避免試驗中出現使用不生產(chǎn)商的產(chǎn)品所造成的誤差，同時(shí)，無(wú)論自制還是商業(yè)提供 培養基都需要按《 商業(yè)性微生物培養基質(zhì)量檢驗規范》進(jìn)行質(zhì)量控制，使用高質(zhì)量的培養 基，才能保證微生物檢驗結果的準確、公正、可靠 。