國標中規定，BP培養基(BP皿)制備后于冰箱內保存48h內使用，而在實(shí)際工作中較難做到，由于工作量不確定，配制量很難掌握，而且要頻繁的制備，給工作帶來(lái)不便，為保證工作質(zhì)量，提高工作效率，減少浪費，我們經(jīng)不同溫度、時(shí)間貯存后的BP平皿對金黃色葡萄球菌檢測效果進(jìn)行了實(shí)驗觀(guān)察，現將結果報告如下：
1 材料與方法
1.1材料
BP干燥培養基由北京陸橋技術(shù)有限公司生產(chǎn)，金黃色葡萄球菌( 25923) 由ATCC提供。
1.2 方法
實(shí)驗用菌株接種肉湯培養復蘇后備用，在測定時(shí)進(jìn)行10倍遞增稀釋?zhuān)姑縨l細菌在2000個(gè)左右，將按常規法配制傾注的BP皿，放入平皿筒中放冰箱( 4℃-8℃) 簡(jiǎn)稱(chēng)“冰筒”、 放入平皿筒中放室溫(4℃-8℃)簡(jiǎn)稱(chēng)“室筒”、直接放冰箱 (4℃-8℃)簡(jiǎn)稱(chēng)“冰散”和直接放室溫(4℃-8℃)簡(jiǎn)稱(chēng)“室散”貯存，對經(jīng)上述條件不同時(shí)間貯存后的BP平皿，分別用微量加樣器每皿加入0.1ml金黃色葡萄球菌菌液，密劃，經(jīng)37℃培養24h，觀(guān)察金黃色葡萄球菌的菌落大小、色澤等，并計數菌落數(分別接種5塊平皿取平均數)；將BP培養基配制于三角瓶中(不傾注平皿)，放冰箱(4℃-8℃)保存不同時(shí)間后，再進(jìn)行溶解，傾注平皿后用微量加樣器每皿加入0.1ml金黃色葡萄球菌菌液，密劃，經(jīng)37℃培養24h，觀(guān)察菌落生長(cháng)情況并計數菌落數(分別接種5塊平皿取平均數)。對照用BP培養基及菌液均系當天配制及稀釋。
2 結果
2.1 BP平皿經(jīng)不同條件貯存后金黃色葡萄球菌檢測結果
BP平皿置冰箱、室溫后在不同時(shí)間內接種金黃色葡萄球菌，置37℃培養24h后計數菌落數， 結果見(jiàn)表 1 。
2.2 BP培養基在冰箱中貯存不同時(shí)間后金黃色葡萄球菌檢測結果
BP培養基配制后于三角瓶中放置，經(jīng)貯存不同時(shí)間后傾注BP平皿，然后接種金黃色葡萄球菌，置37℃培養24h后計數菌落數，結果見(jiàn)表2 。
表 1 BP平板經(jīng)不同條件貯存后金黃色葡萄球菌檢測結果
|
BP平板貯存時(shí)間（d） |
金黃色葡萄球菌檢出數 |
|
對照 |
冰筒（%） |
冰散（%） |
室筒（%） |
室散（%） |
|
當天 |
202 |
— |
— |
203（100.5） |
202（100.0） |
|
1 |
198 |
198（100.0） |
197（99.5） |
197（99.5） |
195（98.5） |
|
2 |
213 |
213（100.0） |
212（99.5） |
204（95.8） |
190（89.2） |
|
3 |
208 |
207（99.5） |
204（98.1） |
186（89.4） |
164（78.8） |
|
4 |
212 |
210（99.1） |
205（96.7） |
158（74.5） |
147（69.3） |
|
5 |
205 |
201（98.0） |
194（94.6） |
127（62.0） |
106（51.7） |
|
6 |
210 |
204（97.1） |
195（92.9） |
110（52.4） |
84（40.0） |
|
7 |
207 |
197（95.2） |
187（90.3） |
88（42.5） |
60（29.0） |
|
10 |
203 |
170（83.7） |
150（73.9） |
42（20.7） |
21（10.3） |
|
14 |
200 |
141（70.5） |
120（60.0） |
19（9.5） |
7（3.5） |
|
21 |
201 |
88（43.8） |
59（29.4） |
3（1.5） |
1（0.5） |
表2 B P培養基在冰箱中貯存不同時(shí)間后金黃色葡萄球菌檢測結果
|
BP培養基貯存時(shí)間（d） |
金黃色葡萄球菌檢出數 |
|
對照 |
檢出數（%） |
|
5 |
205 |
204（99.5） |
|
10 |
203 |
202（99.5） |
|
15 |
212 |
210（99.1） |
|
20 |
199 |
196（98.5） |
|
25 |
208 |
200（96.2） |
|
30 |
204 |
194（95.1） |
3 討論
實(shí)驗結果表明，傾注平皿后的BP培養基放置平皿筒中置冰箱(4℃-8℃) 條件下貯存和直接放冰箱(4℃-8℃) 條件下貯存，前者貯存4d，對金黃色葡萄球菌的檢測效果無(wú)影響(檢出率達99％以上)，貯存7d，檢出率仍達95.2％，貯存10 d，檢出率明顯下降至83.7％；而后者貯存2d，對金黃色葡萄球菌的檢測效果無(wú)影響(檢出率達99％以)，貯存7 d，檢出率下降至90.3％，這一結果與國標法規定BP培養基在傾注平皿后宜在當天使用或冰箱48h內使用的觀(guān)點(diǎn)趨向一致，而前者的結果比國標規定的使用時(shí)間延長(cháng)了許多，說(shuō)明B P平皿在冰箱貯存時(shí)包裝的重要性。由于國標法規定在冰箱內貯存未指明BP平皿的包裝條件，因此可理解為在無(wú)外包裝條件下直接放置。本次結果也基本上印證了這一點(diǎn)。把BP平皿放入平皿筒( 沒(méi)有的也可用紙包起來(lái)再套上塑料袋)中貯存，可能減少了培養基中有效成份的揮發(fā)，從而延長(cháng)了保存期。而將傾注平皿后的B P培養基放置平皿筒中置室溫( 18℃-22℃)條件下貯存和直接放室溫(18℃-22℃) 條件下貯存， 前者貯存1 d后對金黃色葡萄球菌的檢測效果無(wú)影響(檢出率達9 9％以上)，貯存2d后，檢出率下降至95. 8％，貯存3 d后檢出率更是下降至89.4 ％，而后者貯存1d后檢出率達到98.5％，貯存2 d后就明顯下降至89.2％。從第2天起，放室溫的檢出率明顯低于放冰箱的，這可能是因為在室溫貯存溫度較高，濕度也不好控制，使培養基中的水分和有效成份揮發(fā)的較快，從而影響了保存期。說(shuō)明這種方法貯存BP平皿是不可取的。
將BP培養基配制于三角瓶中放冰箱( 4℃-8℃) 貯存，臨用時(shí)加熱溶解傾注平皿，貯存至30d后，金黃色葡萄球菌的檢出率仍達到95.1％，這一結果表明，影響金黃色葡萄球菌檢出率主要是由于BP平皿表面有效成份的揮發(fā)。因此控制有效 成份從表面揮發(fā)是適當延長(cháng) B P平皿保存期的主要關(guān)鍵，最簡(jiǎn)單的方法就是用三角瓶配制好后貯存于冰箱中( 4℃-8℃)， 臨用時(shí)加熱溶解傾注平皿，即省事又減少浪費。
通過(guò)本次調查，發(fā)現完全可以延長(cháng)BP培養基的保存時(shí)間，BP平皿放平皿筒中( 或用紙包嚴后套上塑料袋) ，于冰箱( 4℃-8℃)內可貯存7 d左右。配制在三角瓶中于冰箱內( 4℃-8℃)可貯存至30 d 。另外貯存的BP平皿應適當倒得厚一些，以免倒薄了時(shí)間長(cháng)了發(fā)生干裂， 影響試驗結果。
上一篇：幾種培養基選擇性分離稀有放線(xiàn)菌的方法
下一篇：4 種測定化妝品菌落總數培養基的質(zhì)量比較
海博微信公眾號
海博天貓旗艦店
