《水生微生物實(shí)驗法》——從水、泥和生物體中分離酵母菌

水生酵母菌具有多方面的用途，可作為餌料，發(fā)展水產(chǎn)養殖業(yè)，近年來(lái)用它作為輪蟲(chóng)、豐年蟲(chóng)和魚(yú)蝦幼苗的餌料，其效果都很好；具有同化多種烴類(lèi)化合物的能力，因此從海洋酵母菌中篩選石油酵母是一條重要途徑：同時(shí)能合成分泌維生素和分解多種物質(zhì)，參與了無(wú)機物和有機物的轉化過(guò)程。海洋酵母的分布很廣。在遠近深淺的海水、海泥、海洋動(dòng)植物體表及海洋動(dòng)物的胃腸中都有，甚至在遠離沿岸的海洋空氣中也發(fā)現有酵母菌。因此，分離海洋酵母菌的樣品可來(lái)自多方面，則其分離方法也有多種．

1 ．培養基成分及配制

（1）葡萄糖蛋白胨培養基：

葡萄糖2 克

蛋白胨1 克

酵母膏0.5 克

瓊脂2 克

過(guò)濾的海水1000 毫升

將上面物質(zhì)溶于水中，調pH 為4.5，112 ℃ 蒸汽下滅菌20 分鐘．本培養基適用于分離海洋酵母。

（2）豆芽汁乳酸蔗糖培養基：

蔗糖2 克

乳酸0.5 克

瓊脂2 克

黃豆芽10克

陳海水或蒸餾水100 毫升

取新鮮豆芽10 克放燒杯中．加陳海水或蒸餾水100 毫升．煮沸30 分鐘，用紗布過(guò)濾，再加蔗糖，乳酸和瓊脂，加熱溶勻，補足失水量。

（3）麥芽汁瓊脂培養基：麥芽汁（7 波美度）98 毫升，加瓊脂2 克，青霉素G 鉀鹽40-60毫克，或加500 -1000單位的鏈霉素即成。

2 ．從海水、淡水中分離酵母菌

水中酵母菌密度較低，一般不用稀釋法，而是用濃集法分離。

（1）用無(wú)菌采水瓶從三個(gè)特定站位取一定量的水樣各2 瓶（近岸取100 毫升．遠岸取500-1000毫升），立即分別通過(guò)硝化纖維濾膜（孔徑0.2-0.6 微米）濃集酵母菌。

（2）取下濾膜，分別緊貼于上述三種預先編號的平板培養基上。

（3）重復第（2）步驟，再分離一組3 個(gè)平板（編相應號碼）。

④ 將平皿倒放于24 ℃ 下培養5-7 天，（如果是河口區水樣品應放于37 ℃ 培養3-5 天）后，觀(guān)察其形態(tài)，記錄其數量，如菌群不純，挑取菌落用劃線(xiàn)法分離，直到純化．而后接種于斜面，待用．

3.從海泥或池泥中分離酵母菌

（1）取2 厘米³泥樣，溶于10 毫升無(wú)菌海水（或無(wú)菌水）中振蕩成懸浮液。

（2）待粗粒泥沙下沉后，取三次上清液各1 毫升，分別放于3 個(gè)編號的無(wú)菌培養皿中，重復這個(gè)步驟，再做一組3 個(gè)平板，編相應號碼。

（3）將融化的上述三種培養基冷至45 ℃ 分別傾入培養皿中，立即搖勻。

（4）冷后，于24 ℃ 下培養5-7 天，觀(guān)察其形態(tài)、記錄其數量。若不純，可挑取菌落用劃線(xiàn)法分離，直到獲得純菌落，而后接種于斜面培養基，供鑒定研究。

4 ．從海藻體上分離酵母菌

取5 克鮮藻放入100 毫升無(wú)菌海水中．加玻璃珠振蕩10分鐘，靜置，取上清液用超濾膜法分離。

5 ，從海洋動(dòng)物體表分離酵母菌

用較大的水生動(dòng)物表皮三塊或小動(dòng)物三只，直接于上述三種平板培養基上劃線(xiàn)，在24 ℃ 下培養5-7 天．觀(guān)察形態(tài)，記錄數量．若菌落不純，可用劃線(xiàn)法或稀釋法再分離，待得到純菌落后，接種于斜面，待用。

6 ．從海洋動(dòng)物消化道內含物中分離酵母菌

直接取少量?jì)群�物在平板培養基上劃線(xiàn)，方法同5 。

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