《水生微生物實(shí)驗法》——從泥樣中分離放線(xiàn)菌

水中放線(xiàn)菌無(wú)論在數量上或在種類(lèi)上都比其他的細菌少得多。但在水、沉積物及浮游生物中都能分離到放線(xiàn)菌，如Kpucc 從海泥及浮游生物中分離到灰色放線(xiàn)菌、球孢放線(xiàn)菌及直線(xiàn)白色放線(xiàn)菌等三種。在淡水中也有多種放線(xiàn)菌，如游動(dòng)放線(xiàn)菌屬等。

1 ．培養基成分及其制法

① 葡萄糖酵母膏牛肉膏蛋白胨瓊脂   即埃默森氏培養基．葡萄糖、酵母膏可減至每升l 克，也可省去氯化鈉。此培養基適用于放線(xiàn)菌的分離、其成分如下：

葡萄糖10 克

酵母膏10 克

牛肉膏0.4克

蛋白胨4 克

NaCl （用子淡水種）2.5克

瓊脂15 克

陳海水（用于咸水樣品）

或蒸餾水（用于淡水樣品）1000毫升

調pH 至7.2-7.4 , 121 ℃ 蒸汽下滅菌30 分鐘，制成平板，備用。具體制法參考高氏1 號培養基。

② 高氏（Gause )1號斜面培養基，此種培養基適于放線(xiàn)菌的純化培養。其成分如下；

淀粉（可溶性）20克

KNO3  1 克

MgO2·7H2O   0.5 克

FeSO4·7H2O   0.01 克

K2HPO4   0.5 克

NaCl 0.5克

瓊脂20克

陳海水或蒸餾水1000毫升

pH 7.2-7.4

用少量水將淀粉調成糊狀．取500 毫升煮沸水注入糊狀淀粉中，邊加邊攪拌，使其溶解，除瓊脂外，加入其他成分．溶解后加水至1000 毫升．加入瓊脂，并使其溶化，調pH ，分裝于試管，112 ℃ 蒸汽下滅菌30 分鐘，擺成斜面，備用．

2 ．分離步驟

① 按上法取10 克泥樣，溶解于90 毫升無(wú)菌海水或無(wú)菌水中．加10%酚10滴。邊加邊振蕩，使酚及微生物分布均勻。酚在此能抑制細菌的生長(cháng)。

② 以10倍稀釋法將泥樣沖稀至10^-2和10^-3的懸液．

③ 各取0.1毫升懸液放于淀粉銨平板培養基上．以彎曲玻棒涂勻，每個(gè)稀釋度制2 個(gè)平板．

④ 倒放培養皿于25-30 ℃ 下培養7-15 天．

⑤ 觀(guān)察菌落特征，挑取所需菌落，接種于高氏1 號斜面培養基作純化培養。

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