《水生微生物實(shí)驗法》——水中葡萄球菌的分離與觀(guān)察

這類(lèi)細菌在自然界廣泛分布，從水、空氣、用具、食物及人體等均可找到，除檸檬色葡萄球菌一般不致病外，其余兩種是致病力較強者，尤其是金黃色葡萄球菌能引起化膿性感染，故又稱(chēng)為化膿性球菌，嚴重感染會(huì )導致敗血癥。某些溶血菌株能產(chǎn)生急性胃腸炎的腸毒素。腸毒素耐熱，100℃  30分鐘不被破壞，是食物中毒常見(jiàn)病原之一。所以葡萄球菌也作為水質(zhì)、水產(chǎn)品污染的檢驗項目。通常檢驗方法是．先分離，后鑒定。

1 ．增菌培養

① 將檢樣接種于7.5%氯化鈉肉湯培養基中。

② 置于37℃下培養16-18 小時(shí)。

2 ．分離培養

（1）培養基成分及其制備：

① 蛋黃-疊氮化鈉瓊脂：

蛋白胨10 克

牛肉膏5.5克

NaCl  3 克

疊氮化鈉0.15克

Na₂HPO₄ 0.2克

瓊脂15克

蒸餾水850毫升

將上述成分加入150毫升的蛋黃溶液（蛋黃：生理鹽水=l : 1 ）混勻，分裝滅菌，制成平板，用于培養或分離金黃色葡萄球菌。

② 查普曼心培養基；

牛肉膏l克

膘蛋白胨10 克

甘露醇10 克

NaCl  75 克

瓊脂15 克

蒸餾水1000毫升

0.4%酚紅溶液6 毫升

將上面各成分除酚紅外混合加熱溶解，校正pH 為7.4 , 分裝于燒瓶，115℃ 蒸汽下滅菌10分鐘、用時(shí)臨時(shí)傾注成平板．

③ 血瓊脂：

營(yíng)養瓊脂250毫升

無(wú)菌脫纖維的兔或馬血12.5 毫升

將營(yíng)養瓊脂于112℃ 溶化、自然冷卻，當冷至50-55℃時(shí)，分裝于培養皿，分別按比例加入血液，轉動(dòng)混勻，凝固，備用。

( 2 ）接種與觀(guān)察：

① 將增菌的培養物蛋黃-疊氮化的瓊脂或瓊脂平板或查普曼培養基上劃線(xiàn)或涂布接種。

② 將平板置37℃下培養18-24小時(shí)．

③ 觀(guān)察   金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上形成的菌落呈金黃色（色素不易辨認時(shí)．可挑在濾紙上觀(guān)察）、大而突起、圓形、不透明、表面光滑、周?chē)�有溶血圈，在查普曼培養基上的菌落較細小，菌落周?chē)�呈黃色（分解甘露醇）必要時(shí)可做生化鑒定和動(dòng)物試驗。

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