《水生微生物實(shí)驗法》——水中沙門(mén)氏菌的分離

（十九）水中沙門(mén)氏菌的分離

通常對水質(zhì)的細菌學(xué)質(zhì)量檢測，只要檢驗其中大腸桿菌群數就可對其水質(zhì)作出評價(jià)，病原菌如沙門(mén)氏菌等在水中的相對數量較少，從水中直接檢出的機會(huì )較少，檢驗技術(shù)的難度也較大，故一般不作為水質(zhì)細菌學(xué)檢驗的常規檢驗項目，但作為對醫療機構所排出的污水進(jìn)行細菌學(xué)的監測則具有一定的衛生意義。

由于水中病原菌的數量較少，要分離檢驗它必須先濃集和增殖培養，然后才利用選擇性培養基分離。本實(shí)驗用四磺酸鹽增菌培養液，既特別適合于增殖沙門(mén)氏菌，又能抑制大腸桿菌群和其他非病原菌的生長(cháng)、用亞硫酸秘瓊脂基，能使沙門(mén)氏菌、包括傷寒沙門(mén)氏菌在內生長(cháng)良好．沙門(mén)氏菌能利用葡萄糖，將亞硫酸鉍還原成硫化鉍．形成黑色或黑綠色菌落．其色素滲入培養基內，并擴散到菌落周?chē)�，對�?zhù)光觀(guān)察有金屬光澤．因此種培養基抑制性較強，如培養24 小時(shí)未見(jiàn)長(cháng)出或菌落太小應繼續培養24 小時(shí)，然后才再行挑選．

1 ．培養基成分及其配制方法

（1）四磺酸鹽增菌培養液（也稱(chēng)為T .T ．增菌液）

① 基礎培養基

膘蛋白胨0.5 克

膽鹽0.1克

CaCO₃ 1克

Na₂S₂O₃·5H₂O  3 克

蒸餾水100 毫升

將各成分溶于蒸餾水，并加熱至沸，搖動(dòng)使碳酸鈣混均后分裝于試管內．每管裝10 毫升。121℃ 蒸汽下滅菌15分鐘。

② 碘溶液

碘3 克

K1  2.5 克

蒸餾水10 毫升

將碘化鉀2.5克溶于蒸餾水10 毫升，邊加碘邊研磨，使碘化鉀全部溶解后，加碘存于棕色玻塞試劑瓶?jì)葌溆�。臨用前吸取碘液0.2 毫升，加于盛有10 毫升基礎培養基的試管內。

如每100 毫升的基礎培養基加0.1%煌綠水溶液1 毫升，可加強對非病源菌的抑制作用，如再加L –胱氨酸0.3 克，則更有利用沙門(mén)氏菌的生長(cháng)。

（2）亞硫酸鉍瓊脂基：

① 基礎培養基：

蛋白胨10克

牛肉浸膏5 克

瓊脂20-30克

蒸餾水1000毫升

將這些成分混合后，調pH 至7.2 ，于高壓蒸汽鍋內，121℃ 下滅菌20 分鐘、備用。

② 亞硫酸鉍混合液：

枸櫞酸鉍銨6 克

無(wú)水Na₂SO₃  20 克

葡萄糖10 克

無(wú)水Na₂HPO₄   10 克

蒸餾水200 毫升

溶解枸櫞酸鉍銨6 克于50 毫升沸蒸餾水，溶亞硫酸鈉20 克于100 毫升沸蒸餾水，溶葡萄糖10 克于50毫升沸蒸餾水。

將枸櫞酸鉍銨溶液與亞硫酸鈉溶液棍合，煮沸3 分鐘，趁沸時(shí)再將磷酸氫二鈉溶入。冷卻后加葡萄糖液．盛于無(wú)菌玻塞瓶?jì)�，存冷暗處備用�?SPAN lang=EN-US>

③ 枸櫞酸鐵與煌綠混合液：將枸櫞酸鐵l 克溶于100毫升蒸餾水，加1%煌綠水溶液12.5 毫升，盛于滅菌的玻塞瓶?jì)�，存于冷暗處備用�?SPAN lang=EN-US>

④ 取已滅菌的瓊脂培養基1000毫升加熱融化，以無(wú)菌操作加亞硫酸鉍混合液200 毫升及枸櫞酸鐵與煌綠混合液45 毫升，混勻后制成平板培養基備用。

2 ．沙門(mén)氏菌的濃集

將紗布緊卷成卷后剪成3 個(gè)短段，用細繩在中部縛緊滅菌。把此紗布卷分別懸掛于被檢水體的水面下6 寸，6 尺及12 尺處．3-5 天后水體內的懸浮物和細菌將吸附在紗布卷內，此時(shí)將紗布卷取出，置于無(wú)菌容器內，立即送增菌培養，不可延誤。增菌培養時(shí)分別將紗布卷內的吸水擠出，接種增菌培養液，或直接將紗布卷的全部或一部分放于培養液內，在37℃ 下培養2-5 天。

3 ．分離培養

取經(jīng)2 天培養的三種增菌液分別吸出1 毫升接種于編好代號和注明日期的平板培養基上，每種樣品接種2 份。第三、四、五天每種樣品照樣接種2 份。接種后，均置子37℃ 下培養48小時(shí)后觀(guān)察菌落，做好記錄．典型的菌落呈黑色或帶有金屬光澤。但是，有時(shí)某些沙門(mén)氏菌菌落也可能呈綠色。如無(wú)典型的黑色菌落，綠色的也應挑取鑒定．即使是黑色的菌落，也可能不是沙門(mén)氏菌，而是產(chǎn)生硫化氫的變形桿菌及某些大腸桿菌。最后比較各樣品的檢驗結果。

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