《水生微生物實(shí)驗法》——綠菌屬的富集培養及分離

（十四）綠菌屬的富集培養及分離

綠菌屬含有葉綠素，是光合性的嚴格厭氧的有機體。特征是單細胞卵球形，不運動(dòng)，革蘭氏陰性。由于具有葉綠素，細胞團塊呈綠色；吸收峰為750 納米。能氧化硫化氫于細胞外沉淀，此類(lèi)細菌分布于海泥、淡水泥及海水中．泥生綠菌能將硫氧化為硫酸鹽、嗜硫代硫酸鹽綠菌能氧化硫代硫酸鹽，連四硫酸鹽及分子氮．

1 ．富集培養

( 1 ）富集培養液成分及其制備：

NH₄Cl    1 克

KH₂PO₄    1 克

MgCl₂    0.5克

NaHCO₃    2 克

Na₂S ·9H₂O   1 克

NaCl   海生種30 克

淡水種10 克

FeCl₃·6H₂O    0.0005克

水1000 毫升

將上述各鹽溶解于水中，用磷酸調pH 為7.3 。因此種培養液有很高的選擇性．無(wú)需滅菌，但非常不穩定．需在使用前配制。

（2）接種培養：

① 在大量曝光和分解有機物產(chǎn)生硫化氫的地方采淤泥．

② 將淤泥放在50毫升的廣口磨口玻璃塞瓶中，放入數量0.5-1 厘米高．

③ 裝滿(mǎn)液體富集培養基，上塞排除空氣．

④ 置于20-30 ℃ 下培養，并在離瓶4 時(shí)處放幾盞25 瓦鎢絲燈。

⑤培養3-10天后觀(guān)察，至較多綠色細菌出現為止，隨后紅色或紫色菌也跟著(zhù)發(fā)生，故不宜拖延分離時(shí)間。若有紅色或紫色菌很快出現．并且生長(cháng)旺盛，應試驗不同來(lái)源的材料。

2 ．分離純化培養

（1）培養基成分及制備，綠菌屬瓊脂培養基成分如下：

NH₄Cl    1 克

KH₂PO₄    1 克

MgCl₂    0.5克

NaCl   海生種30 克

淡水種10克

瓊脂     10-15克

水    700毫升

將上述各成分混合于高壓下蒸煮溶解。如不立即使用，應在121 ℃ 蒸氣下滅菌15 分鐘。

立即使用前，先制備下列溶液．

① NaHCO₃   2 克加水100 毫升。

② Na₂S·9H₂O 1克加水100毫升。

③ FeCl₃·6H₂O  5 毫克加水100 毫升。

④ 1N 的H₃PO₄

將以上各液于121 ℃ 蒸汽下滅菌15分鐘。同時(shí)將綠菌屬瓊脂培養基融化，于水溶中冷至45 ℃ 。溫熱溶液① 、② ．③ 至45 ℃ ，無(wú)菌地倒入上述培養基充分混合。用無(wú)菌的磷酸調pH7.3 。分裝于150×16 毫米鈉玻璃試管中，放在45 ℃ 水溶中．

采用搖管法〔 見(jiàn)下節的著(zhù)色菌屬的分離〕 培養。

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