《水生微生物實(shí)驗法》——石油微生物種群的分離

（十）石油微生物種群的分離

隨著(zhù)對各海域石油的開(kāi)采利用，石油對海區污染將不可避免地影響生態(tài)平衡及漁獲量。為解決這個(gè)間題，可利用能降解石油的微生物．這首先要對此類(lèi)微生物分離篩選。選出降解石油能力強的菌株進(jìn)行培養利用．

1 ．培養基配制

（1）港灣鹽培養基配制：

NaCl 10 克

MgCl₂·6H₂O   2.3 克

KCl    0.3 克

加蒸餾水至1 升

（2）基礎培養基配方：

葡萄糖2.0 克

酵母汁1.0克

酪蛋白氨基酸（酪蛋白水解物）   5.0克

純瓊脂20克

加海水1000 毫升

在高壓滅菌前調整供細菌用的pH7.0 ，供霉菌和酵母菌用的要調至5.5 ，高壓滅菌各培養基，冷至44 ℃ 后，供細菌用的，每升加10 毫克的抑真菌劑；供真菌和酵母菌用的，每升加鏈霉素和四環(huán)素各50 毫克，搖勻后，制成平板培養基。

（3）油鹽培養基（雙倍濃度）:

KNO₃   2.0 克

MgSO₄    1.0克

汽油（無(wú)去垢的）10.0毫升

蒸餾水1000毫升

① 硅酸鉀配制。在100 毫升的7%KOH 溶液內加熱溶解吸。10克的硅酸膠。

② 加酚紅指示劑（1.003%）于雙倍濃度油鹽培養基中。

③ 分別�、� 和② 各50毫升于121 ℃ 蒸汽下滅菌巧分鐘．

④ 當油鹽培養基冷至室溫時(shí)，加0.5 毫升的KH2PO4和1 毫升的20%磷酸．

⑤ 將50 毫升的硅酸鉀溶液（pH6-7 桔紅色）傾至50毫升的油鹽培養基中，迅速混勻．而后各倒20 毫升于每個(gè)培養皿中，制成平板培養基．

⑥ 劃線(xiàn)前平板培養基應是干燥的，小的培養皿可作為微孔過(guò)濾樣品的微生物數量計算。

2 ．分離步驟

（1）用采樣器分別從石油污染海區和相對無(wú)污染海區取水樣和底泥樣品。

（2）分別移l 毫升水樣和1 克底泥樣，各放于稀釋試管內，按10 倍稀釋法，稀釋至10^-4

（3）搖勻稀釋液后，各用無(wú)菌移液管吸取適量的原水樣及各稀釋度水樣和泥樣注入每一類(lèi)型的平板培養基上，各作雙份。

（4）用無(wú)菌玻瑞曲棒涂勻平板培養基上的接種樣，

（5）接種后的培養皿于20℃ 溫箱中顛倒培養．

（6）異養型細菌可培養7 天，觀(guān)察計算其菌落，利用石油的微生物．培養14天而后觀(guān)察記數．

（7）從培養的細菌中，取出不同類(lèi)型的菌落，在單濃度油鹽培養基上，加上汽油5%做生長(cháng)實(shí)驗。

3 ．將實(shí)驗記錄填于表2-6

表2-6 石油微生物種群分離實(shí)驗記錄表

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