細菌學(xué)中的診斷新技術(shù)（1）

隨著(zhù)現代科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，特別是免疫學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，新的細菌診斷技術(shù)和方法已廣泛用于食品微生物的鑒別。傳統的細菌分離、培養及生化反應，已遠遠不能滿(mǎn)足對各種病原微生物的診斷以及流行病學(xué)的研究。近年來(lái)國內外學(xué)者不斷努力，已創(chuàng )建不少快速、簡(jiǎn)便、特異、敏感、低耗且適用的細菌學(xué)診斷方法，尤其是DNA探針和多聚酶鏈反應技術(shù)的發(fā)展和應用，明顯提高了細菌的診斷水平。

一、快速酶觸反應及細菌代謝產(chǎn)物的檢測

　　快速酶觸反應是根據細菌在其生長(cháng)繁殖過(guò)程中可合成和釋放某些特異性的酶，按酶的特性，選用相應的底物和指示劑，將他們配制在相關(guān)的培養基中。根據細菌反應后出現的明顯的顏色變化，確定待分離的可疑菌株，反應的測定結果有助于細菌的快速診斷。這種技術(shù)將傳統的細菌分離與生化反應有機的結合起來(lái)，并使得檢測結果直觀(guān)，正成為今后微生物檢測發(fā)展的一個(gè)主要發(fā)展方向。Rosa等將樣本直接接種于Granda培養基，經(jīng)18小時(shí)培養后，B群鏈球菌呈紅色菌落且可抑制其他菌的生長(cháng)。

　　Delise等新合成一種羥基吲哚-β-D葡萄糖甘酸（IBDG），在β-D葡萄糖苷酶的作用下，生成不溶性的藍，將一定量的IBDG加入到麥康蓋培養基瓊脂中制成MAC-IBDG平板，35℃培養18小時(shí)，出現深藍色菌落者為大腸埃希氏陽(yáng)性菌株。其色彩獨特，且靛藍不易擴散，易與乳糖發(fā)酵菌株區別。

二、免疫學(xué)方法檢測細菌抗原或抗體的技術(shù)

　　在細菌診斷中利用免疫學(xué)的各種方法日益受到人們的極大關(guān)注，從而簡(jiǎn)化了病原微生物的鑒定手續。

1．抗血清凝集技術(shù)

　　早在1933年，Lancefield就成功地用多價(jià)血清對鏈球菌進(jìn)行了血清分型。隨著(zhù)抗體制備技術(shù)的進(jìn)一步完善，尤其是單克隆抗體的制備，明顯提高了細菌凝集實(shí)驗的特異性，今天廣泛用于細菌的分型和鑒定，如沙門(mén)氏菌、霍亂弧菌等。

　　2．乳膠凝集實(shí)驗

　　將特異性的抗體包被在乳膠顆粒上，通過(guò)抗體與相應的細菌抗原結合，產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的凝集反應。通常此法需獲得細菌純培養物，再將培養物與致敏乳膠反應。業(yè)已用于鑒定大腸桿菌O157；H7

　　3．熒光抗體檢測技術(shù)

　　用于快速檢測細菌的熒光抗體技術(shù)主要有直接法和間接法。直接法是在檢測樣品上直接滴加已知特異性熒光標記的抗血清，經(jīng)洗滌后在熒光顯微鏡下觀(guān)察結果。間接法是在檢樣上滴加已知的細菌特異性抗體，待作用后經(jīng)洗滌，再加入熒光標記的第二抗體。如研制成的抗沙門(mén)氏菌熒光抗體，用于750份食品樣品的檢測，結果表明與常規培養法符合率基本一致。

　　4．協(xié)同凝集試驗（COA）

　　業(yè)已證實(shí)，葡萄球菌A蛋白（SPA）具有與人及各種哺乳動(dòng)物IgG的Fc段結合的能力，而不影響抗體Fab段的活性。近年來(lái)國內外學(xué)者采用抗體致敏的SPA檢測細菌即協(xié)同凝集試驗。如Rahman等用協(xié)同凝集試驗鑒定霍亂弧菌O1群的初代分離物做快速篩選，比常規法節省時(shí)間，對204份材料用兩種方法比較表明協(xié)同凝集試驗具有較高的特異性和敏感性。

　　5．酶聯(lián)免疫測試技術(shù)

　　酶聯(lián)免疫技術(shù)的應用，大大提高了檢測的敏感性和特異性，現已廣泛地應用在病原微生物的檢驗。

　　應用酶聯(lián)免疫技術(shù)制造的mini-Vidas全自動(dòng)免疫分析儀，是用熒光分析技術(shù)通過(guò)固相吸附器，用已知抗體來(lái)捕捉目標生物體，然后以帶熒光的酶聯(lián)抗體再次結合，經(jīng)充分沖洗，通過(guò)激發(fā)光源檢測，即能自動(dòng)讀出發(fā)光的陽(yáng)性標本，其優(yōu)點(diǎn)是檢測靈敏度高，速度快，可以在48小時(shí)的時(shí)間內快速鑒定沙門(mén)氏菌、大腸桿菌O157：H7、單核李斯特菌，空腸彎曲桿菌和葡萄球菌腸毒素等。

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