《水生微生物實(shí)驗法》——不同類(lèi)型微生物的分離方法（9）

（九）磷細菌的分離

磷細菌是將海水、淡水和土壤中的無(wú)效磷轉化為有效磷的細菌并可分為兩個(gè)類(lèi)型．一是促使含磷有機物分解，釋放出能被動(dòng)物利用的磷．即有效磷，稱(chēng)為有機磷細菌．另一類(lèi)是能促使不溶性無(wú)機磷轉化為可溶性磷的細菌，稱(chēng)為無(wú)機磷細菌，此類(lèi)細菌能產(chǎn)生具有溶解不溶性磷酸鈣的酸性物質(zhì)。

1 ．有機磷細菌的分離

（1）平板培養基制備：

① 蒙金娜基礎培養基成分及制法

葡萄糖     10.0克

( NH4）2SO4   0.5克

MgSO4·7H2O    0.3 克

NaCl 0.3 克

KCl   0.3 克

FeSO4·7H2O    0.036 克（0.5%溶液6 毫升）

MnSO4 0.03 克（0.5%溶液6 毫升）

CaCO3   5 克

瓊脂    18-20 克

將這些成分溶于蒸餾水中，加熱溶化，混勻，加至1000毫升后分裝于150 毫升錐形瓶中、包裝好，于121 ℃ 蒸氣下滅菌20-30 分鐘，備用。

② 卵黃稀釋液制法：本液須在制平板前臨時(shí)制備．用酒精擦凈新鮮雞蛋外殼，用解剖刀切破雞蛋兩端，流去蛋清后將蛋黃流入已滅菌的錐形瓶中，約加等量的無(wú)菌水）搖勻即成。

③ 將蒙金娜基礎培養基融化，冷至50℃ 后，立即再加入卵黃液，每12-15 毫升的基礎培養基加卵黃稀釋液1 毫升作為有機磷源，混勻后分裝于培養皿內凝成平板．

（2）各取兩個(gè)不同站位的海粘泥和河口粘泥各5 克，分別溶于裝有45 毫升無(wú)菌水及若干玻璃球的錐形瓶?jì)�，搖勻，各取上清液l 毫升分別注入裝有9毫升無(wú)菌水的試管中，即沖稀10 倍。

（3）用接種環(huán)取1 環(huán)懸液接種于平板培養基上，用曲-玻棒涂勻，每種懸液接種2 個(gè)平板（即每種樣品作4 個(gè)平板）, 顛倒8 個(gè)平板在25-30 ℃ 下培養1-2 天，

（4）觀(guān)察菌落形態(tài)，由于有機磷細菌能分解卵黃中的有機磷產(chǎn)生磷酸，故在其菌落的周?chē)�可形成一個(gè)碳酸鈣溶解區。若未得到純菌落，則挑選菌苔少許，用稀釋液在平板培養基上分離，直到純化后，再移接到牛肉膏蛋白胨培養基（牛肉膏3 克，蛋白胨5 克，瓊脂15 克，水1000 毫升。pH7.2-7.4）斜面上保存．

2 ．無(wú)機磷細菌的分離

(1)分離培養基的制備：用2 克的磷酸鈣代替蒙金娜基礎培養基中的碳酸鈣成分即可配成。

(2)取樣、接種、培養均按上述有機磷細菌的方法進(jìn)行，

(3)觀(guān)察菌落的形態(tài)：因為有磷酸鈣粉末的存在，制成的培養基不透明，因而接種后若能使磷酸鈣溶解的細菌，在其菌落周?chē)�就�?huì )出現透明區．據此可知分離的細菌為無(wú)機磷細菌，可挑取其菌落作為純化培養，純化后接種斜面培養基上保存。

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