《水生微生物實(shí)驗法》——取樣（2）

二、取樣地點(diǎn)的選擇

（一）采淡水（河水、湖泊水稱(chēng)）樣品的地點(diǎn)選擇

河流中微生物種類(lèi)與數量因流速及水深等因素的不同而有明顯變化。為了獲得有代表性的水樣應選擇在經(jīng)常流動(dòng)的河道中央，水深為20-30厘米的水層取樣。若調查垂直分布，則應選擇在河流最深處為采集點(diǎn)。

湖泊在夏季通常會(huì )形成顯著(zhù)的溫躍層，所以一年內最好有季節性的取樣。采樣地點(diǎn)設在湖泊中心與沿岸的具有代表性的水域。

在判斷污水對河流與湖泊的影響時(shí)，一般應在污水入口處按一定距離及有代表性的出口地點(diǎn)分別設站取樣。同時(shí)還要在沒(méi)有污染的上游水域采樣作對照。

（二）海洋、港海取樣地點(diǎn)的選擇

同海洋微生物種群的特點(diǎn)有關(guān)的環(huán)境因素主要是：溫度，鹽度，靜水壓力以及有機物質(zhì)等。但是這些因素在港灣及沿岸帶又往往受潮汐、河水的流入、周?chē)�環(huán)境污染的影響而有很大的變化。所以取樣一方面要根據具體環(huán)境設點(diǎn)：另一方面又要考慮不同的調查目的（如基礎調查、監測調查、專(zhuān)題調查和應急調查等）而設站取樣。

設站的一般原則為：

（1）近岸較密，遠岸較疏。

（2）重點(diǎn)水域，如河口、排污口、漁場(chǎng)、養殖場(chǎng)、海濱浴場(chǎng)、旅游區、國防設施區和海上石油開(kāi)發(fā)區等，應設較密的取樣點(diǎn)。對照水域的采樣可以疏些。

（3）取樣地點(diǎn)力求縱、橫成斷面，如海上斷面與岸線(xiàn)垂直、河口區的斷面和徑流擴散方向一致或垂直、開(kāi)闊海區縱、橫斷面成網(wǎng)格狀，港灣地區視地形、潮流、航道的具體情況布設取樣斷面。

( 4 ）海洋微生物的取樣站位應盡可能與原有海洋調查標準斷面站位吻合。

( 5 ）力求與固定監測站的岸邊點(diǎn)銜接．

（三）沉積物取樣地點(diǎn)的選擇

水底沉積物中微生物的數量較大而穩定，可以按照不同的調查研究目的及地質(zhì)、地形的特征設點(diǎn)取樣。

沉積物取樣地點(diǎn)通常應著(zhù)重考慮：

( 1 ）按底質(zhì)結構類(lèi)型設點(diǎn)，如泥質(zhì)、沙質(zhì)、巖石、混合底質(zhì)等分別設點(diǎn)。

( 2 ）按地形結構設點(diǎn)，如平面和斜面，海溝與海灘、航道及岸邊以及受潮汐影響的不同深處都應該取代表性的地形沉積物。

( 3 ）按不同層位設點(diǎn)，如氧化層、還原層、沖刷層、沉積層、有機物層、礦質(zhì)層等均可以按不同深度分別取樣。

三、水樣采集

采集供微生物學(xué)檢驗的水樣必須按無(wú)菌操作技術(shù)進(jìn)行。并保證在送檢過(guò)程中不受外界污染，這樣才能反映當時(shí)當地的微生物真實(shí)情況。

（一）采水器

采集深水樣品較復雜，要有專(zhuān)門(mén)的取樣設備和熟練的取樣技術(shù)。

采水器種類(lèi)很多，文獻記載的已有一百多種。目前常用的有：擊開(kāi)式采水器，即J-Z 式采水器：復背式采水器：尼斯金（Niskin ）采水器；顛倒采水器，即南森（Nansen ) 式采水器；深水細菌取樣器；無(wú)菌取樣瓶等。我國常用的有下列三種。

1 ．擊開(kāi)式采水器（J-Z 式采水器）

擊開(kāi)式采水器是參考佐貝爾（ZoBell ）采水器改制而成的。主件是玻璃水樣瓶，不能耐受水深500 米以深的靜水壓力，僅適用于500 米以淺的海區。由于采水瓶事先已滅菌，因此所采的水樣污染率較低，是一種比較理想的淺水微生物采水器。

 擊開(kāi)式采水器包括機架和水樣瓶?jì)刹糠�。機架部分呈" V ”形，其兩翼成72 度角張開(kāi)為機架的正面，整個(gè)機架是用一塊厚6 毫米，寬210 毫米，高290 毫米的黃銅板制成。在機架正面距架腳120毫米處，裝有一條半環(huán)形的銅帶。帶的一端絞在機架左翼，另一端由元寶螺母固定在機架右翼上。機架下部?jì)梢黹g裝一半圓形托板撐住采水瓶，并可調高低。入水玻璃管被機架左上角的彈簧夾和右上角敲擊杠桿固定住。敲擊杠桿下有個(gè)直角形的彈簧連接桿，位于機架的中線(xiàn)處。連桿下部呈鉤狀。

水樣瓶可用500毫升注射用的生理鹽水瓶，橡皮瓶塞中央插一支直角形的內徑6-7 毫米的玻璃管，管橫端連接長(cháng)約260毫米的厚壁像皮管，橡皮管的另一端連接入水玻璃管。整個(gè)采水器是用兩個(gè)固定夾固定在綱絲繩上。使用方法如下：

( l ）將水樣瓶洗凈編號，把橡皮塞和進(jìn)水管安裝好，然后用紙包好（如果是準備在深水取樣，必須在瓶?jì)确乓恢е�撐橡皮塞的玻璃棒，防止深水中高壓將橡皮塞壓入瓶�(jì)龋�，�?jīng)高壓蒸氣（121℃ ）滅菌20 分鐘后，待尚未冷卻時(shí)迅速用火焰將入水玻璃管的未端封固，使瓶?jì)忍幱诎胝婵諣顟B(tài)

( 2 ）將采水瓶置于機架的托板上，用半環(huán)形銅帶箍住瓶的中部。把曲形橡皮管放在機架右上角的下缺口內，再將入水玻璃管橫放于機架兩翼上角的兩缺口內，用左上角的彈簧丈夾住水管的封閉端。

( 3 ）兩固定夾將整個(gè)采水器固定在絞車(chē)的鋼絲繩上。

( 4 ）放開(kāi)絞車(chē)鍋絲繩，將采水器放到預定水層，然后投下使錘，令其擊中敲擊杠桿的后端，使前端迅速曉起將玻璃入水管擊斷，于是橡皮伸直。由于瓶?jì)忍幱诎胝婵諣顟B(tài)，水樣迅速被吸入瓶?jì)�。與此同時(shí)，彈簧杠桿因橫肢受杠桿后端部壓力而下降，使此桿下端掛鉤上的使錘脫開(kāi)，并沿鋼絲繩下滑擊在第二采水器的杠桿上，通過(guò)以上的連續動(dòng)作，可使固定在同一條鋼絲繩上的多個(gè)采水器相繼采到各個(gè)頂定深度（一般取0 、10 、20 、 35 、50 、75 、100 、150 、200 米等．最后至海底以上的5 米處—— 底層水）的水樣。

2 ．復背式采水器

復背式采水器是由一個(gè)厚壁橡皮球（球口的直徑為8 毫米，容量為500 毫升）附加在顛倒采水器上構成的�？稍谳^深的水層使用。

使用前將橡皮球洗凈，編號，用棉花把球口塞好，用紙將橡皮球與塞一鏈一釣分別包起來(lái)，在高壓蒸氣（121 ℃ ）下，滅菌20 分鐘。使用時(shí)，將一個(gè)金屬裝配環(huán)安裝在采水器的下部，然后再把橡皮球內部的空氣排出，用塞子將球口塞緊使其呈扁縮狀態(tài)，橡皮球被卡在裝配環(huán)上。球塞連接一條銅鏈。銅鏈的另一端用一卡式掛鉤釣在顛倒采水器的釋放裝置和彈簧片之間的鋼絲繩上。銅鏈的長(cháng)度必須合適．既足以使顛倒采水器顛倒下落．又能夠在其顛倒之際把球口上的塞子拉開(kāi)。

復背式采水器具有兩個(gè)優(yōu)點(diǎn)：

( 1 ）可以應用于較深水層采樣．

( 2 ）在用顛倒采水器的同時(shí)也可以用橡皮球采到水樣，從而節省了人力和時(shí)間．

3 ．表層水樣采集瓶在采集表層水樣時(shí)，船上一律禁止排污�？捎脽o(wú)菌水樣采集瓶，浸入船頭水下20-30厘米處取水。

如果調查船的船弦較高時(shí)，可以用表層水樣采集瓶。表層水樣采集瓶是用一根桿子，上面用夾子固定一個(gè)已滅菌的玻璃磨口瓶，或者用繩索吊起的裝在鐵框內的無(wú)菌采水瓶，下面掛一金屬錘，將采水瓶降至水中預定深度時(shí)，用繩子拉開(kāi)瓶塞裝滿(mǎn)水樣，提出水面，蓋好瓶塞，裝入冰筒，立即送往實(shí)驗室處理。

（二）自來(lái)水樣的采集

自來(lái)水樣的采集較簡(jiǎn)便，但要求取樣后立刻檢查。取水樣過(guò)程為：

( 1 ）先用火焰（酒精燈或煤氣燈）灼燒自來(lái)水龍滅菌 。

( 2 ）將水龍頭完全旋開(kāi)，放水數分鐘，排除管道內的積存水。

( 3 ）用普通無(wú)菌玻璃瓶直接放在水龍頭下取樣，但不能裝滿(mǎn)，應留空間以便搖勻吸樣。如果水中含有余氯，必須按照每500 毫升水樣加入3%硫代硫酸鈉（Na₂S₂O₃·5H₂O  )溶液1 毫升中和水祥中的余氯，以防水中余氯的殺菌作用。

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