目前, 我室對培養基的滅菌均采用高壓蒸氣滅菌法,此方法最為有效,但滅菌時(shí)間較長(cháng),不適合一些實(shí)驗室應急品的快速消毒滅菌,同時(shí)若操作不當也易造成滅菌不徹底。近年來(lái), 微波滅菌由于其具有滅菌效率高,速度快,處理后無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)而日益受到重視。為了嘗試用微波滅菌來(lái)替代傳統的高壓滅菌,我們選用家用微波爐用于我室常用培養基的滅菌, 效果較為滿(mǎn)意,現將實(shí)驗過(guò)程總結如下。
1 方法
1.1實(shí)驗材料 ①菌種 : 大腸桿菌 ATCC 25922, 金黃色葡萄球菌ATCC 25923 ( 由太和醫院檢驗科細菌室提供) ,枯草芽孢桿菌( 由我院病原學(xué)實(shí)驗室提供,進(jìn)行了菌種鑒定) 。②培養基制備: 按處方配制液體培養基 ,營(yíng)養瓊脂( 北京奧博星生物技術(shù)有限責任公司) 培養基各5瓶, 每瓶2 0 0 m l , 盛于 3 0 0ml 錐形瓶中, 然后逐瓶放入微波爐托盤(pán)中央 ,照射至預定時(shí)間取出適量 。
1.2 培養 液基傾注試管,固基傾注平板,37℃培養 1—7天逐日觀(guān)察結果。
1.3 接種 將微波滅菌后的培養基分別接種大腸桿菌ATCC 25922 ,金黃色葡萄球菌 ATCC 25923和枯草芽孢桿菌 , 培養 l 8—2 4 h觀(guān)察其菌落特征。
1.4 實(shí)驗儀器 微波爐( WD 9 0 0 B型格蘭仕微波爐, 9 0 0 W,2450 MH Z, 順德市格蘭仕微波爐電器有限公司) ; 電熱恒溫培養箱( H H W2 1 —6 0 0型,湖北黃石醫療器械廠(chǎng)) 。
2 結 果
2.1 對經(jīng)微波滅菌的培養基經(jīng) 3 7℃恒溫培養箱培養數 日后觀(guān)察, 見(jiàn)表 1 。
表1 微波滅菌的兩種培養基經(jīng)37℃恒溫培養1-7天觀(guān)察
培養基種類(lèi) |
微波時(shí)間(min) |
37℃恒溫培養箱培養時(shí)間 |
1天 |
2天 |
3天 |
4天 |
5天 |
6天 |
7天 |
營(yíng)養瓊脂培養基 |
1 |
1個(gè)菌落生長(cháng) |
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菌落增多 |
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2 |
無(wú) |
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1個(gè)菌落生長(cháng) |
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3 |
無(wú) |
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1個(gè)菌落生長(cháng) |
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4 |
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無(wú) |
無(wú) |
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無(wú) |
5 |
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無(wú) |
無(wú) |
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無(wú) |
液體培養基 |
1 |
有菌生長(cháng) |
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2 |
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無(wú) |
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無(wú) |
3 |
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無(wú) |
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無(wú) |
4 |
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無(wú) |
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無(wú) |
5 |
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無(wú) |
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無(wú) |
2.2 質(zhì)量檢測 分別接種不同菌株在兩種培養基上的形態(tài)觀(guān)察,見(jiàn)表2 。
表 2 接種在兩種培養基上的不同菌株的形態(tài)觀(guān)察
菌株 |
營(yíng)養瓊脂培養基 |
液體培養基 |
大腸桿菌ATCC 25922 |
菌落圓形,直徑2-3mm,邊緣整齊,灰白色 |
均勻渾濁生長(cháng) |
葡萄球菌ATCC 29523 |
菌落圓形,直徑2mm,邊緣整齊,金黃色 |
均勻渾濁生長(cháng) |
枯草芽孢桿菌 |
扁平,灰色,不透明,干燥,皺紋,邊緣不整齊的大菌落 |
在液體表面形成灰白色膜狀生長(cháng) |
3 討論
①營(yíng)養瓊脂培養基在微波作用下 5 m i n可達到滅菌效果 。 ②液體培養基在微波作用下2 mi n即可達到滅菌效果。③在一定條件下 , 干燥狀態(tài)對殺菌速度影響大;同等條件下 , 含水量多易滅菌。
④實(shí)驗結果表明: 用微波爐消毒滅菌可以縮短滅菌時(shí)間, 而不影響培養基的營(yíng)養成分, 此種方法安全可靠,滅菌好。
⑤有報道 :微波可以殺滅各種微生物,不僅可以殺滅細菌繁殖體,也可以殺滅真菌、病毒和細菌芽孢。由于一般病原微生物的細胞液吸收微波的能力強于周?chē)渌镔|(zhì),因此微波能在 1 — 2 m i n內有效殺死致病細菌。在微波爐中溫度達7 0℃以上就能殺死一般細菌。
4 微波滅菌原理
微波爐產(chǎn)生的微波頻率為 2450 MHZ,是消毒常用的微波之一。具有升溫快,殺菌力強, 消毒時(shí)間短的特點(diǎn),但其穿透能力較弱,適宜于小件或厚度不大的物品的消毒滅菌 。有試驗證明其殺菌機理除有熱效應外,還具有某些非熱效應,是熱效應和非熱效應綜合作用的結果 。有人認為,非熱效應是因電磁場(chǎng)改變了細胞膜附近的離子分布和細胞膜的通透性, 從而改變細胞的代謝之故。有人認為,當微波照射時(shí),高分散相的蛋白質(zhì)特別是酶分子以及氨基酸、肽等可選擇性的吸收微波能量,從而改變其分子結構或個(gè)別部分的結構,致使生化反應發(fā)生改變等。關(guān)于微波的生物學(xué)作用機制至今尚無(wú)明確的一致解釋?zhuān)?有待進(jìn)一步探討。
大量的研究報道顯示 : 微波是實(shí)現安全,可靠,高效滅菌的一種方法; 但微波對不同菌種的滅菌, 還需通過(guò)實(shí)驗具體的滅菌條件。應用微波爐時(shí),要盡量創(chuàng )造有利條件, 以達到家庭, 實(shí)驗室快速滅菌的要求。
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