細菌的接種方法有很多種,如劃線(xiàn)法、涂布法、傾注法、斜面接種法、液體培養基接種法、螺旋接種法等,其方法和應用各有不同,下面進(jìn)行解釋以幫助實(shí)驗人員選擇操作。
劃線(xiàn)法:此法主要用于菌種分純,獲得單菌落
由接種環(huán)沾取少許待分離的材料,在無(wú)菌平板表面進(jìn)行平行劃線(xiàn)、扇形劃線(xiàn)或其他形式的連續劃線(xiàn),微生物細胞數量將隨著(zhù)劃線(xiàn)次數的增加而減少,并逐步分散開(kāi)來(lái),如果劃線(xiàn)適宜的話(huà),微生物能一一分散,經(jīng)培養后,可在平板表面得到單菌落。
優(yōu)點(diǎn):可以觀(guān)察菌落特征,對混合菌進(jìn)行分離。
缺點(diǎn):不能用于菌落計數。
涂布法:此法主要用于菌落總數計數
先將培養基熔化后趁熱倒入無(wú)菌平板中,然后用無(wú)菌吸管吸取0.1ml菌液接種在已凝固的瓊脂平板上。再用無(wú)菌L型玻璃棒將菌液在平板上涂抹均勻,將涂抹好的平板平放于桌上20~30min,使菌液滲透入培養基內,然后將平板倒轉,保溫培養,至長(cháng)出菌落后即可計數。
優(yōu)點(diǎn):可以計數,可以觀(guān)察菌落特征。
缺點(diǎn):接種前需梯度稀釋?zhuān)樟枯^少,較麻煩,平板不干燥效果不好,容易蔓延。
傾倒法:此法主要用于菌落總數的計數
吸取1ml菌液加入平板中,倒入已融化并冷卻至45~50℃的細菌培養基,輕輕轉動(dòng)平板,使菌液與培養基混合均勻,冷疑后倒置,適溫培養。至長(cháng)出菌落后即可計數。
優(yōu)點(diǎn):可以計數,較方便。
缺點(diǎn):接種前需梯度稀釋?zhuān)荒苡^(guān)察菌落特征,不適用于嚴格好氧菌和熱敏感菌。
斜面接種法:此法主要用于保存菌種,或觀(guān)察細菌的某些生化特性和動(dòng)力
用接種環(huán)或接種針伸入菌種管內,挑取用來(lái)移種的菌落。伸入斜面培養管內,先從斜面底部到頂端拖一條接種線(xiàn),再自下而上蜿蜒劃線(xiàn),或直接自下而上地蜿蜒劃線(xiàn)。接種完成之后,用火焰滅菌培養管口,并塞上棉塞,置于37℃培養。
液體培養基接種法:此法主要用于菌液比濁實(shí)驗
用滅菌接種環(huán)挑取菌落或標本,在試管內壁與液面交界處輕輕研磨,使細菌均勻得散落在液體培養基中。
螺旋接種法:此法主要用于菌落總數計數
Spiral plater 可以在無(wú)任何全部或中間稀釋的情況下快速細菌接種。對數減少的樣品容量以阿基米德螺旋線(xiàn)的形式被自動(dòng)分注在旋轉式培養基表面。培養基上每一點(diǎn)的容量可以被知曉和校準。菌液的濃度可以通過(guò)培養皿上一定區域的菌落數量除以同區域樣品分注量來(lái)計算。
優(yōu)點(diǎn):螺旋接種法菌液無(wú)需稀釋?zhuān)ㄆ渌臃N方法均需經(jīng)過(guò)梯度稀釋才能計菌落數),自動(dòng)化接種,效率高,可節省3/4的耗材和時(shí)間
缺點(diǎn):產(chǎn)品成本高,適用于樣品量比較大的實(shí)驗
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