肉湯保存法用于淋球菌保種的研究及效果觀(guān)察

摘要：目的尋找一種更為簡(jiǎn)單、方便且有效的保存淋球菌的方法。方法對分離的3 4株經(jīng)菌落形態(tài)、氧化酶試驗及生化反應鑒定為淋球菌的菌株用 肉湯在不同的溫度下進(jìn)行保種 ； 并用本實(shí)驗室自制的培養基對保存菌株進(jìn)行定期復蘇。結果   采用肉湯保存法，淋球菌在-2 0 ℃至少可保存2個(gè)月，-30℃至少可保存 2～3個(gè)月， -70℃至少可保存 1年以上；并發(fā)現液氮中淋球菌的保存效果最好及保存時(shí)間最長(cháng) 。結論  肉湯保種法可以用于淋球菌的保 存 。 

1 材料與方法

1.1試驗主要試劑

氧化酶試劑(鹽酸四甲基對苯二胺) ，購自廣西皮膚病研究所；糖發(fā)酵試劑及淋球菌培養基由實(shí)驗室自己配制 。 

1.2菌株來(lái)源

34株淋球菌標本分離自南昌市各醫院門(mén)診就診患者 。 

1.3肉湯的配制

取250g牛肉(去除脂肪與筋膜) 剁碎，加蒸餾水500 ml 并放人少量的NaOH，然后煮1h ( 若已經(jīng)在4℃冰箱過(guò)夜則煮30 mi n即可) 。過(guò)濾除渣，調整容量至500ml，再加入5 g蛋白胨，2.5 g Na C1，調整p H值至 7.4 ～7.6 ，高壓滅菌后冷卻置 4℃冰箱保存備用。 

1.4菌株的分離與純化

將尿道或官頸分泌物接種于淋球菌培養基上，36.5℃ 、 5% ～ 10%CO₂ 孵育2 4 h 。挑取染色鏡檢為革蘭陰性球菌、氧化酶試驗陽(yáng)性、糖發(fā)酵試驗只能夠分解葡萄糖的菌落進(jìn)行純培養。 

1.5 菌種的保存

將純培養2 4 h后的淋球菌菌落用接種環(huán)刮下，洗入已經(jīng)預溫的肉湯管中(菌濃度約為1×10⁸) ，每個(gè)標本分別收集4管后分別置-20℃、-30℃、-70℃冰箱以及液氮中保存。 

1.6 菌種的定期復蘇

將保存于上述溫度中的菌株進(jìn)行定期復蘇。復蘇時(shí)間為保存第7天、 第1 5天、第30天、第 2個(gè)月、第 3個(gè)月 、第 6個(gè)月以及第1 2個(gè)月， 復蘇結果以長(cháng)出肉眼可見(jiàn)的淋球菌菌落為標準。 

2   結 果

復蘇結果見(jiàn)附表 。 

附表 134株淋球菌不同保存溫度下保存不同時(shí)間后的存活率

 

3   討 論

目前淋球菌最理想的保種方法為冷凍真空干燥法，但該方法需真空泵設備且操作相對復雜。本方法與巧克力液體培養基保種法和脫脂牛奶保種法相似 ，并發(fā)現肉湯保存法在相同的條件下對淋球菌的保存效果與文獻報道的脫脂牛奶保存法無(wú)明顯差異。對于細菌實(shí)驗室 而言，本保種方法所使用的材料來(lái)源更加方便，并且肉湯的透明度高，有利于對細菌的濃度進(jìn)行觀(guān)察 ，但本方法保種過(guò)程中需要注意調節肉湯的pH值 ，否則容易影響細菌的活力 。