免疫學(xué)的研究方法（1）

 免疫學(xué)實(shí)驗技術(shù)隨著(zhù)免疫學(xué)學(xué)科的發(fā)展而得到不斷改進(jìn)和完善，并對免疫學(xué)學(xué)科的發(fā)展起著(zhù)極大的推動(dòng)作用�，F在，免疫學(xué)實(shí)驗技術(shù)已成為生物學(xué)、醫學(xué)及其他學(xué)科實(shí)驗研究的一種重要手段，特別在一些微量的、特異性要求高的測定中更顯示了其特有的優(yōu)越性。免疫學(xué)的研究方法多、范圍廣。

一、血清學(xué)反應

    在體外進(jìn)行的體液免疫反應一般采用血清進(jìn)行試驗，稱(chēng)為血清學(xué)反應。血清學(xué)反應既可用已知抗原檢測未知抗體，也可用已知抗體檢測未知抗原。故常用來(lái)進(jìn)行體外體液免疫功能的測定、轉染病的診斷、微生物的分類(lèi)鑒定以及廣泛應用于生物化學(xué)、遺傳學(xué)、胚胎發(fā)育學(xué)、病毒學(xué)、細菌學(xué)等各學(xué)科的研究之中。

    抗原抗體反應的一般規律：特異性、可逆性、定比性、階段性、條件性。

( 一 ) 凝集反應

    細菌、紅細胞等顆粒性抗原與其特異性抗體結合后，在有電解質(zhì)存在時(shí)，互相凝聚成肉眼可見(jiàn)的凝集小塊，稱(chēng)為凝集反應。參與凝集反應的抗原稱(chēng)為凝集原，抗體稱(chēng)為凝集素。

    在凝集反應中，單個(gè)抗原體積大，而抗原總面積小，為使抗原和抗體間充分結合，常須稀釋抗體 ( 抗血清 ) 。

1 ．直接凝集反應

    有玻片法和試管法。玻片法簡(jiǎn)便、快速，是一種定性試驗，可用于菌種鑒定、測定血型等。試管法可定量判斷血清中抗體的相對含量，可用于協(xié)助臨床診斷或供流行病學(xué)調查。

2 ．間接凝集反應

    將可溶性抗原 ( 或抗體 ) 吸附于一種載體顆粒表面，然后與抗體 ( 或抗原 ) 結合，在有電解質(zhì)存在的適宜條件下，可發(fā)生凝集反應，稱(chēng)為間接凝集反應。

( 二 ) 沉淀反應

    可溶性抗原，如細菌的外毒素、內毒素、血清、病毒的可溶性抗原和組織浸出液等與相應抗體結合，在適量電解質(zhì)存在下，聚合成肉眼可見(jiàn)的白色沉淀，稱(chēng)為沉淀反應。其抗原稱(chēng)為沉淀原，抗體稱(chēng)為沉淀素。在沉淀反應中，抗原分子較小，單位體積內所含的量多，與抗體結合的總面積大，為了使抗原抗體按比例結合，常稀釋抗原。

1 ．環(huán)狀沉淀反應

    在小試管內先加入已知抗血清，然后小心加入待檢抗原于血清上表面，使之成為分界清晰的兩層．一定時(shí)間后，凡兩層液面交界處出現白色環(huán)狀沉淀者即為陽(yáng)性反應。此法簡(jiǎn)單、敏感，所需被檢材料少，可用作抗原的定性試驗如炭疽病的診斷、血跡鑒定、沉淀素的效價(jià)滴定等。

2 ．絮狀沉淀反應

    抗原與抗血清在試管內混合，在有電解質(zhì)存在時(shí)，抗原抗體復合物可形成混濁沉淀或絮狀凝聚物。此反應可用于診斷螺旋體引起的梅毒病 (Kahn 氏試驗 ) 以及用以滴定毒素、類(lèi)毒素和抗毒素的效價(jià)。

3 ．免疫擴散

    瓊脂凝膠呈多孔結構，能允許各種抗原抗體在其中自由擴散�？乖�抗體在瓊脂凝膠中擴散由近及遠形成濃度梯度，當兩者在比例適當處相遇即發(fā)生沉淀反應，形成沉淀帶。由于一種抗原抗體系統只出現一條沉淀帶，故本反應能將復合抗原成．分加以區分，從而可了解抗原復合物的組成，并可將所得沉淀用特異方法染色及用生物活性 ( 酶活性 ) 、同位素標記等方法鑒定抗原成分。按其操作技術(shù)特點(diǎn)，可以分為單擴散和雙擴散。

    單擴散是抗原抗體中一種成分擴散，而雙擴散則是兩種成分在凝膠內彼此都擴散。下面主要介紹雙擴散：用 1 ％瓊脂澆成厚 2 -3mm 的凝膠板，在其上按一定圖形打圓孔或長(cháng)方形槽，在相鄰孔 ( 槽 ) 內滴加抗原和抗體，在飽合濕度下，擴散數日，觀(guān)察沉淀帶。如圖所示，每個(gè)抗原與抗血清反應生成的沉淀弧融合，表明上面兩個(gè)孔中的抗原是相同的；在 B 中，形成兩條交叉的沉淀帶，表明上面兩孔中的抗原不相同；在 C 中，兩個(gè)抗原有相同的部分，但有部分差別，且主要抗原可干擾次要抗原的擴散，形成不完全融合的沉淀帶，并向次要抗原方向形成一個(gè)交叉角；在 D 中的情況則表明 ab 抗原孔中含有兩個(gè)抗原，其中一個(gè)抗原與右邊抗原孔中的抗原成分相同，而另一個(gè)抗原成分是獨立的，即 ab 孔中的抗原成分比 a 孔中抗原成分復雜。雙擴散可用來(lái)鑒定未知樣品的組分，比較不同樣品的抗原性。根據擴散距離測定抗原的含量以及檢測血清中各種免疫球蛋白、甲胎蛋白、 HBsAg 等。但此法敏感性不高，且需時(shí)較長(cháng)。

4 ．免疫電泳

    將瓊脂雙擴散與瓊脂電泳技術(shù)相結合的方法。待檢樣品 ( 含復合抗原 ) 先在瓊脂凝膠板上電泳，將抗原的各個(gè)組分在板上初步分開(kāi)，然后再在點(diǎn)樣孔一側或兩側打槽，加入抗血清，進(jìn)行雙向雙擴散。電泳遷移率相近而不能分開(kāi)的抗原物質(zhì)，又可按擴散系數不同形成不同的沉淀帶，從而進(jìn)一步加強了對復合抗原組分的分辨能力。

    免疫電泳敏感性高，特異性強，近年來(lái)在生物學(xué)、生物化學(xué)、微生物學(xué)、免疫學(xué)及臨床醫學(xué)等領(lǐng)域中廣泛應用�？捎脕�(lái)進(jìn)行抗原與抗體成分的研究、生物制品純度分析、甲胎蛋白和肝炎協(xié)同抗原 (HAA) 的診斷等，并在此基礎上又發(fā)展成為對流免疫電泳和火箭免疫電泳等。

( 三 ) 免疫熒光技術(shù)

    抗體與某些特定的熒光物質(zhì)結合而成為熒光標記抗體，仍能特異性地結合抗原成為熒光標記的抗體抗原復合物，在熒光顯微鏡下可被觀(guān)察到。熒光素與抗體結合能偵察出抗原所在部位，故可用來(lái)進(jìn)行抗原的定位或定性測定。

( 四 ) 放射免疫測定法

    是將放射性同位素的靈敏性和免疫學(xué)抗原抗體反應的特異性結合起來(lái)的一種技術(shù)。此法是一種定量分析方法，能檢測生物體液中的微量免疫活性物質(zhì)，具有靈敏、特異、精密、準確和快速等特點(diǎn)。

( 五 ) 補體參與的抗原抗體反應

    這是一種有補體參與，并以綿羊紅細胞和溶血素作指示系統的、靈敏度很高的抗原抗體反應。

    其原理：①補體可與任何抗原抗體的復合物相結合；②指示系統如遇補體后就會(huì )出現明顯的溶血反應。

    反應過(guò)程：先將被檢系統的抗原、抗體和補體加在一起， 37 ℃水浴 30min 或 4 ℃冰箱過(guò)夜，然后加入紅細胞和溶血素，繼續作用一段時(shí)間后觀(guān)察結果。若不發(fā)生溶血，即判為補體結合反應陽(yáng)性，表示被檢系統中的抗原和抗體發(fā)生了特異性結合，．并結合了補體。若發(fā)生了溶血，則為補體結合反應陰性，表示被檢系統中抗原、抗體末結合不是特異的，末激活補體，所以當加入指示系統后，在綿羊紅細和溶血素結合后，激活了補體，發(fā)生了溶血。本反應為嚴格的定量試驗，除待檢抗原 ( 或抗體 ) 外，其余成分均需事先滴定，以定量參加反應，其敏感性和特異性均較高，常用于診斷病毒性疾病。