朊蛋白(prion,也稱(chēng)作為“慢病毒”)與許多疾病相關(guān),包括某些傳染性海綿狀腦。╰ransmissible spongiform encephalopathies,TSEs)、克雅。–reutzfeldt-Jakob disease,CJD;包括新的變異型)、格-施-沙綜合征(Gerstmann-Sträussler-Scheinker syndrome)、人類(lèi)致死性家族性失眠癥和庫魯病、綿羊和山羊的瘙癢病、家畜的牛海綿狀腦。╞ovine spongiform encephalopathy,BSE),以及鹿、糜鹿及貂的傳染性腦病。盡管克雅病已經(jīng)傳播到了人類(lèi),但是還沒(méi)有證據證實(shí)發(fā)生過(guò)由這些病原體所引起的實(shí)驗室感染。不過(guò),在操作已感染或潛在感染的人或動(dòng)物材料時(shí),還是應當謹慎注意防護。
當進(jìn)行與傳染性海綿狀腦病有關(guān)材料的工作時(shí),應根據微生物因子和所研究標本的特征來(lái)選擇生物安全水平,并向國內權威機構咨詢(xún)后進(jìn)行。在中樞神經(jīng)系統組織中發(fā)現有最高濃度的朊蛋白,動(dòng)物研究還表明在脾臟、胸腺、淋巴結和肺內可能也有高濃度的朊蛋白。最近的研究表明,舌和骨骼肌組織也存在潛在朊蛋白感染的危險[21-24]。
由于很難徹底滅活朊蛋白,因此盡可能地使用一次性器具,在生物安全柜的工作臺面使用一次性防護罩,這些措施都非常重要。
主要應該預防的是避免污染材料的食入或實(shí)驗室工作人員的皮膚刺傷。由于朊蛋白不能被普通的實(shí)驗室消毒和滅菌方法所滅活,故應當遵循以下防護措施:
1、強烈建議使用專(zhuān)用儀器設備,亦即不與其他實(shí)驗室共用儀器。
2、必須穿戴一次性防護服(隔離衣和圍裙)和手套(對病理學(xué)家而言,要在兩層橡膠手套間戴鋼絲網(wǎng)手套)。
3、強烈建議使用一次性塑料制品,它們可按干廢棄物處理并丟棄。
4、由于滅菌的問(wèn)題不能使用組織處理機(tissue processors),應當使用廣口瓶或燒杯(塑料材質(zhì))替代。
5、所有操作必須在生物安全柜中進(jìn)行。
6、必須特別小心以避免產(chǎn)生氣溶膠、意外食入、劃傷或刺傷皮膚。
7、福爾馬林固定的組織,即使在長(cháng)時(shí)間福爾馬林的浸泡后,仍應視作具有感染性。
8、含有朊蛋白的組織標本暴露于96%甲酸1 h可以基本失活[24, 25]。
9、實(shí)驗臺垃圾,包括一次性手套、隔離衣和圍裙,均應當采用多孔負荷蒸汽滅菌器在134~137℃高壓滅菌18 min一個(gè)循環(huán),或高壓滅菌3 min六個(gè)循環(huán),然后再焚燒。
10、鋼絲網(wǎng)手套或Kevlar手套等非一次性用具,均必須收集起來(lái)清除污染。
11、污染有朊蛋白的感染性廢液應當用含20g/L(2%)有效氯的次氯酸鈉(終濃度)處理1 h。
12、多聚甲醛熏蒸的方法不能降低朊蛋白的滴度,朊蛋白對紫外線(xiàn)照射也具有抵抗力。但是,安全柜仍必須用標準方法來(lái)清除污染(如甲醛蒸氣),以滅活可能存在的其他微生物因子。
13、朊蛋白污染的生物安全柜和其他表面可以采用含20g/L(2%)有效氯的次氯酸鈉處理1 h來(lái)清除污染。
14、HEPA過(guò)濾器摘除后需要在至少1000℃的溫度下焚燒。在焚燒之前推薦進(jìn)行下述處理:
a. 在摘除前用噴漆噴頭給過(guò)濾器的裸露表面噴霧,
b. 在摘除過(guò)程中將過(guò)濾器“裝袋”,以及
c. 從工作柜中除去HEPA過(guò)濾器,這樣可以不污染難以操作的安全柜壓力排風(fēng)系統。
15、用具應當用含20g/L(2%)有效氯的次氯酸鈉浸泡1 h,然后用水徹底清洗再進(jìn)行高壓滅菌。
16、不能高壓滅菌的用具可以反復用含20g/L(2%)有效氯的次氯酸鈉潤濕超過(guò)1h來(lái)進(jìn)行清潔,并要求用水沖洗以清除殘留的次氯酸鈉。
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