微生物純培養的獲得

微生物在自然界中不僅分布很廣，而且都是混雜地生活在一起。要想研究或利用某一種微生物，必須把它眾混雜的微生物類(lèi)群分離出來(lái)，以得到只含有一種微生物的培養。微生物學(xué)中將在實(shí)驗條件下，從一個(gè)細胞或同種細胞群繁殖得到的后代稱(chēng)為純培養。純培養的獲得有下列幾種方法。

一、平板劃線(xiàn)分離法

    有接種環(huán)以菌操作沾取少許待分離的材料，在無(wú)菌平板表面進(jìn)行平行劃線(xiàn)、扇形劃線(xiàn)或其他形式的連續劃線(xiàn)，微生物細胞數量將隨著(zhù)劃線(xiàn)次數的增加而減少，并逐步分散開(kāi)來(lái)，如果劃線(xiàn)適宜的話(huà)，微生物能一一分散，經(jīng)培養后，可在平板表面得到單菌落。

二、稀釋倒平板法

    先將待分離的材料用無(wú)菌水作一系列的稀釋?zhuān)ㄈ?1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），然后分別取不同稀釋液少許，與已溶化并冷卻至 45 ℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻后，傾入滅過(guò)菌的培養皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時(shí)間即可出出菌落。如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個(gè)菌落，這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)細菌細胞繁殖形成的。隨后挑取該單個(gè)菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。

三、單孢子或單細胞分離法

    采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個(gè)細胞或單個(gè)個(gè)體進(jìn)行培養以獲得純培養，稱(chēng)為單細胞（單孢子）分離法。單細胞他離法的難度與細胞或個(gè)體的大小成反比，較大的微生物如藻類(lèi)、原生動(dòng)物較容易，個(gè)體較小的細菌則較難。在顯微鏡下使用單孢子分離器進(jìn)行機械操作，挑取單孢子或單細胞進(jìn)行培養。也可以采用特制的毛細管在載玻片的瓊脂涂層上選取單孢子并切割下來(lái)，然后移到合適的培養基進(jìn)行培養。單細胞分離法對操作技術(shù)有比較高的要求，多限于高度專(zhuān)業(yè)化的科學(xué)研究中采用。

四、利用選擇性培養基分離法

    各種微生物對不同的化學(xué)試劑、染料、抗生素等具有不同的抵抗能力，利用這些特性可配制合適某種微生物而限制其它微生物生長(cháng)的選擇培養基，用它來(lái)培養微生物以獲得純培養。

    另外，還可以將樣品預處理，消除不希望分離到的微生物。如加溫殺死營(yíng)養菌體而保留芽孢，過(guò)濾去除絲狀菌體而保留單孢子。

微生物純培養分離方法的比較