新型淋球菌培養基分離培養淋球菌的研究

淋球菌是主要的性傳播疾病——淋病的病原體，它可引起人類(lèi)生殖器、泌尿道化膿性感 染。目前有許多新技術(shù)如ELISA法，熒光抗體法，基因探針及分子雜交法等，但培養法一直是診斷淋病的金標準。只是其培養要求很高，多依賴(lài)進(jìn)口培養基 ，如 Oxoid公司生產(chǎn)的Gc培養基、T-M培養基、美國生產(chǎn)的 New York培養基等，雖然陽(yáng)性率得到提高，但定貨費時(shí) ，  價(jià)格昂貴。我國基層醫療單位常用桂敏和GC培養基，但存在培養性能不高等缺點(diǎn)，如桂敏培養基較低的分離率等．并不適合在基層推廣。因此，國內外學(xué)者對淋球菌培養基做了很多研究，取得了一定成果，但并不是十分滿(mǎn)意。為適應性病防治的需要，我們將自制的一種簡(jiǎn)便、經(jīng)濟、有效、快速的新型淋球菌培養基，與英國產(chǎn)T-M培養基對臨床菌株的分離效果進(jìn) 行比較；同時(shí) ，就其培養性能穩定效期進(jìn)行了測試 ，以便進(jìn)一步推廣應用新型淋球菌培養基結果報告如下。

 

1.材料與方法

1.1培養基

 

T-M 培養基：英國OXIOD公司進(jìn)口散裝品。新型淋球菌培養基：蛋白胨1.5％，玉米淀粉0.1％，K₂HPO₄0.4％，KH₂PO₄0.1％，NaCl0.5％，瓊脂1％溶解于蒸餾水，121℃高壓滅菌15min后，冷卻到60℃左右，無(wú)菌操作按比例加入適當的營(yíng)養成分和抑菌劑，充分混勻后傾注一次性平皿 。4℃冰箱保存備用，接種前于孵箱預熱 。 

 

1.2生化反應試劑儀器設備

 

氧化酶試驗試劑 ( 購自Sigma公司，自配 )、葡萄糖發(fā)酵管 、麥芽糖發(fā)酵管、蔗糖發(fā)酵管購白杭州天和微生物試劑有限公司

 

1.3標本的采集

采集涂片檢查白細胞內外有G-腎形雙球菌的疑似淋病患者的尿道或宮頸分泌物。 

 

1.4   方法

 

1.4.1鑒定初步簽定：菌落形態(tài) ( 成圓形、凸形，濕潤 )， 

光滑，半透明或者灰白色的菌落，邊緣呈花瓣狀 ．直徑為0.5 ～ 1.0mm，用白金耳觸之有 黏性 ，符合上述特性，氧化酶試驗 ( +) ，G-雙球菌。最后鑒定：發(fā)酵試驗 ，葡萄糖 ( +)，乳糖(-) ，麥芽糖(-) ，蔗糖(-) ，22℃及普通瓊脂不生長(cháng)，可鑒定為淋球菌陽(yáng)性結果。

 

1.4.2臨床菌株分離陽(yáng)性率比較    將采集的疑似淋病患者標本373例分別接種于兩種培養基上，置燭缸內 ，點(diǎn)燃蠟燭，蓋密缸蓋 ，置培養箱內35℃～36℃培養24～28h，觀(guān)察結果 。

 

1.4.3保存效期比較     將淋球菌菌株10株接種于不保存期新型淋球菌培養基上，置燭缸內，點(diǎn)燃蠟燭，蓋密缸蓋，置培養箱內35℃～36℃培養24h，觀(guān)察結果。

 

1.5統計學(xué)分析

采用χ²檢驗分析。 

 

2 結果

 

2.1臨床菌株分離陽(yáng)性率比較

本實(shí)驗中，新型淋球菌培養基檢出陽(yáng)性病例329人，檢出率88.2％：T-M培養基檢出陽(yáng)性病例323人，檢出率86.6％。  見(jiàn)表 1 。

 

表 1        2種培養基淋球菌臨床菌株分離陽(yáng)性率比較 (χ10^-2)  

[注]與 T-M培養基相比較 ，*P>0.05差異無(wú)統計學(xué)意義

 

2.2保存效期比較

實(shí)驗表明，在24周時(shí)間內，不同保存時(shí)間培養基上淋球菌菌落數及菌落大小差異無(wú)統計學(xué)意義。見(jiàn)表 2 。

 

  表2  新型淋球菌培養基培養性能穩定性測試

[注]與保存4周的新型淋球菌培養基相比較，  *P>0.05 差異無(wú)統計學(xué)意義

 

3 討 論

    淋球菌培養是診斷淋病的主要依據。常用 T-M培養基由于價(jià)格因素、效期等因素而不適用于人數較多的群體和基層檢測，需制作簡(jiǎn)單、成本低、原材料易得和培養效果好的培養基 。本研究采用的新型淋球菌培養基系我院中心實(shí)驗室自制，成本低、原材料易獲得。在本實(shí)驗 中就其培養性能同常用的 T- M 培養基進(jìn)行了比較。在新型淋球菌培養基上，淋球菌生長(cháng)良好 ，2 4h培養可見(jiàn)中小菌落生長(cháng)，其檢出淋球菌陽(yáng)性率為88.2％，與T-M培養基比較差異無(wú)統計學(xué)意義( P>0.05 ) ．表明新型淋球菌培養基在培養性能方面可替代進(jìn)口的T-M培養基。 

  

    此外，培養法診斷淋病對淋病診治單位而言，必然帶來(lái)淋球菌培養基儲備問(wèn)題。目前 ，我國的淋病診治單位包括了基礎醫院、診所以及大型醫院等。他們彼此的淋病標本多少不等，相差很大。但是，如前所述，進(jìn)口培養基價(jià)格較貴，每人份的成本價(jià)在人民幣1 0元左 右 ，即使是珠海進(jìn)口分裝的MTM選擇培養基也要 8元／個(gè) ；且多采用大包裝 ；同時(shí)因受 培養基有效期和貨物運輸周期的影響，從進(jìn)口到用戶(hù)手上，一般都接近失效，因為有效期只有3個(gè)月。這對于標本少的基層醫院而言 ，必然意味著(zhù)培養基利用效率不高，浪費嚴重。如采用自己配制的辦法，由于培養基配制過(guò)程繁瑣，不易質(zhì)量控制，不為臨床所接受。而本實(shí)驗結果表明 ．采用該包裝的新型淋球菌培養基在4 ℃條件下保存6個(gè)月后 ，其培養效果仍同新配制的培養基無(wú)差異 ( P>0.05) 。因此 ，我們認為，新型淋球菌培養基保存期可 以長(cháng)達6個(gè)月。這對促進(jìn)中小醫療單位采用培養法診斷淋病起到積極作用�？傊�，新型淋球菌培養基具有經(jīng)濟、簡(jiǎn)便、培養性能高等優(yōu)點(diǎn)，可以替代進(jìn)口的T-M 培養基在基層醫療單位推廣應用 。