(一)水
制備培養基必須使用純凈的,無(wú)微量金屬,殺菌性和抑菌性化學(xué)物質(zhì)的蒸餾水。注意,以加氯的水進(jìn)行蒸餾所得的蒸餾水,即使在使用前通過(guò)離子交換樹(shù)脂,也偶含有顯著(zhù)量的游離氯.所以應進(jìn)行測試,如正聯(lián)甲苯胺試驗顯色。測試后,以硫代硫酸鈉中和后或進(jìn)行重復蒸餾后才能使用。
(二)瓊脂
瓊脂俗稱(chēng)洋菜,英文名agar ,為由海藻類(lèi)(主要足石花菜)提取出來(lái)的一種膠體多糖,即半乳聚糖水解后,產(chǎn)生半乳糖及少量五烷糖和有機硫。其化學(xué)性質(zhì)系為一種不帶側鏈的半乳聚糖甙,含有90%右旋半乳糖和10%左旋半乳糖。在約每10個(gè)吡喃半乳糖單位有一個(gè)首位或次位的羥基被硫酸脂化。其陰離子脂組(-SO2 -OH )主要是與鈣結合,但也有少數是和鎂、鈉、或鉀結合。
其制造方法,一般是在每年7-9 月收集海中石花菜,洗滌并經(jīng)曬干后保存。于冬季冰凍開(kāi)始時(shí),按1:30 比例將干藻放入水中煮沸,然后加入硫酸少許并煮沸5-6 小時(shí)。過(guò)濾后待冷,用“漏子”推成粗條,再經(jīng)日曬夜凍2-3 周后,即成條狀瓊脂。
除少數菌種外,絕大多數細菌都不能分解瓊脂,因而瓊脂在培養某中無(wú)營(yíng)養價(jià)值,只是在液體培養基中凝結成半固體或固體培養基而已。
國外商售瓊脂一般比較純凈,國內瓊脂則含有雜質(zhì)較多,故在使用前應先用冷水浸泡洗滌后才能使用。
供細菌培養使用的品質(zhì)優(yōu)良的瓊脂應具有下列特性:
( l )凝固點(diǎn)不超過(guò)
( 2 )
( 3 )在
( 4 )在
( 5 )與水的結合水平至少在50%以上,以保證完全的溶解性。
(6)含水量不超過(guò)原重17%。
( 7 )燃燒殘余物不超過(guò)3 %。
(8)金屬最高允許含量,鉛0.0005%,鐵0.001%,鎂0.1%,鈣0.2%,鈉0.4%,并不得含有抗菌物質(zhì)。
( 9 )透明度:在蒸餾水中加熱溶解后,呈微乳白色透明凝塊。無(wú)混濁沉淀及微粒。
( 10 )凝膠強度:即在1.5%瓊脂平板
在實(shí)際應用中,一般均將瓊脂做成按0.5%的差距,遞增至3%的生理鹽水瓊脂平板,然后用接種環(huán)或接種針試行劃線(xiàn)涂布,以決定該批瓊脂實(shí)際使用的濃度。
下一篇:培養基的一般常用成分(2)