細菌的繁殖方法是簡(jiǎn)單無(wú)性二分裂法。球菌可從不同的平面進(jìn)行分裂,結果成為雙球菌、四聯(lián)球菌、八聯(lián)球菌、鏈球菌或葡萄球菌。桿菌的分裂一般沿橫軸進(jìn)行,但也有分枝狀分裂的。細菌分裂時(shí),細胞增大,核苷酸倍增。革蘭氏陰性菌分裂時(shí)整個(gè)細胞壁內陷,革蘭氏陽(yáng)性菌分裂時(shí)胞漿膜開(kāi)始形成橫隔,最后形成細胞壁。
大部分細菌繁殖速度很快,接種在培養基中,短時(shí)間培養就可發(fā)生顯著(zhù)變化。在適宜條件下,每個(gè)大腸桿菌增殖一代約需20 分鐘。若保持此速度增殖,10 小時(shí)后一個(gè)細菌可以繁殖成10 億個(gè)細菌。但由于營(yíng)養物質(zhì)的消耗、毒性代謝產(chǎn)物的積聚等,實(shí)際上不可能始終保持這樣的速度。培養到一定時(shí)間、細菌死亡的速度亦隨培養時(shí)間而增加。某些細菌、如結核桿菌,繁殖速度緩慢,繁殖一代需要15-18小時(shí)。
(一)細菌的生長(cháng)曲線(xiàn)
接種一定數量的細菌于合適的培養基中,其生長(cháng)過(guò)程具有一定的規律性。如以菌數的對數作為縱座標,生長(cháng)時(shí)間作橫坐標,便能得出一條曲線(xiàn),稱(chēng)為生長(cháng)曲線(xiàn)。
(二)細菌各生長(cháng)期的特點(diǎn)及其影晌因素
1.遲緩期
在這個(gè)時(shí)期,細菌的數目并不增加,但細菌體內物質(zhì)增長(cháng),體積增大,代謝活躍。即種入的細菌要有一個(gè)適應新培養環(huán)境的過(guò)程。在此時(shí)期,細菌產(chǎn)生足夠量的酶、輔酶以及一些必需的中間產(chǎn)物。當這些物質(zhì)在培養基中達到一定濃度時(shí),細菌才能開(kāi)始分裂增殖。
影響這個(gè)時(shí)期的因素有:
( 1 )接種細菌的數量:接種數量的多少與此期時(shí)間的長(cháng)短一般呈正比,但若培養基內的營(yíng)養物質(zhì)及氣體張力對接入菌適宜時(shí),接種數量的影響則相對較小。
( 2 )接種細菌的菌齡:若接種的細菌是遲緩期的細菌,接種到新培養基2 小時(shí)僅有少量細菌生長(cháng)。若是在對數生長(cháng)期,則接種后可不經(jīng)過(guò)遲緩期而立即開(kāi)始生長(cháng),其增殖速度與其親代增殖速度一致。若是在生長(cháng)晚期,則生長(cháng)較緩。例如,傷寒桿菌的接種菌齡為2.5-3 小時(shí),接種至新培養基后,只需40分鐘即可增殖一代,若菌齡為6.25小時(shí),則增殖一代需85分鐘 ;當菌齡為14-16小時(shí),則需160 分鐘才能增殖一次。
( 3 )接種細菌本身的特性;如大腸桿菌遲緩期較短,而棒狀桿菌和分枝桿菌則生長(cháng)較慢。
( 4 )培養基的性質(zhì):培養基適宜,接種菌易于迅速地適應新環(huán)境,因而遲緩期較短,反之,則將延長(cháng)。
( 5 )培養的溫度:合適的溫度可使遲緩期縮短。例如在牛奶中培養鏈球菌
1. 對數生長(cháng)期
在此時(shí)期,細菌分裂增殖呈有規律的高速度進(jìn)行,細菌數的對數與時(shí)間幾乎呈直線(xiàn)關(guān)系,例如細菌的數目若在一定時(shí)間內增加10 倍,則雙倍時(shí)間可增加100 倍,3 倍時(shí)間可增加1000倍,每代增殖時(shí)間縮至最短。影響這個(gè)時(shí)期的因素有:
( 1 )細菌的特性:各種細菌在正常條件下增殖一代的時(shí)間各有不同。例如,大腸桿菌約為20 分鐘,沙門(mén)氏菌和變形桿菌約為20~30分鐘,葡萄球菌、鏈球菌和雙球菌平均約為25-30分鐘。假單胞桿菌約為30-40 分鐘。而分枝桿菌則為幾小時(shí)甚至十數小時(shí)。
( 2 )培養基質(zhì)量:一般來(lái)說(shuō),培養基內營(yíng)養成分越適宜,則生長(cháng)增殖越快。例如,培養傷寒桿菌于蛋白胨水中,當蛋白胨濃度由0.125%增至1%時(shí),增殖一代時(shí)間可由800分鐘減至40分鐘。于培養基中增加葡萄糖、能縮短細菌增殖一代所需的時(shí)間,并可獲得較多的菌量。反之,則時(shí)間延長(cháng)。(3 )培養的溫度:各種細菌生長(cháng)的最適溫度也各有不同培養溫度愈接近其最適溫度,其增殖一代的時(shí)間愈短。例如培養大腸桿菌,當溫度為21.5 –
3.穩定期
又稱(chēng)平衡期。細菌分裂增殖,在對數生長(cháng)期最高,但在其后期即有逐漸減低趨勢,以后進(jìn)入穩定期,即在死亡的菌數與新增殖的菌數接近于平衡狀態(tài),活菌數既沒(méi)有增加也沒(méi)有減少的時(shí)期。此期的長(cháng)短隨菌種和培養情況而不同有的可以保持幾天,有的僅維持數小時(shí)。此期總菌數最高,故常稱(chēng)為最高濃度。各種菌的最高濃度是不同的。
4.衰退和死亡期
在穩定期后,細菌死亡數逐漸比新分裂的菌數增多,活菌數迅速減少。這種狀?烧J為是細菌對不適環(huán)境的一種適應過(guò)程,也稱(chēng)為死亡增長(cháng)期。此期依不同菌種和環(huán)境而有很大的不同。其后,菌數減少漸慢,呈有規律的過(guò)程,常稱(chēng)為對數死亡期,死亡皆況隨菌種而不同。例如流行性腦膜炎球菌在數天內完全死亡,而其他細菌則可以延長(cháng)至數月甚或數年。
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