潔凈室（無(wú)菌室）沉降菌測試操作規程

目的：建立潔凈室中沉降菌的測試標準操作規程，保證藥品在規定潔凈級別內進(jìn)行生產(chǎn)。
2范圍：潔凈室的沉降菌的監測。
3依據：國家標準GB/T 16294-1996。
4職責：QA潔凈度監測人員、微生物檢驗人員對本制度的實(shí)施負責。
5內容
5.1潔凈室：對塵粒及微生物污染規定需進(jìn)行環(huán)境控制的房間或區域。
5.2潔凈工作臺：一種工作臺或者與之類(lèi)似的一個(gè)封閉圍擋工作區。其特點(diǎn)是自身能夠供給經(jīng)過(guò)過(guò)濾的空氣或氣體，如垂直層流潔凈罩、水平層流罩、垂直層流潔凈工作臺、水平層流潔凈工作臺、自?xún)羝鞯取?BR>5.3潔凈度：潔凈環(huán)境內單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑懸浮粒子的允許統計數。
5.4菌落：細菌培養后，由一個(gè)或幾個(gè)細菌繁殖而形成的一細菌集落，簡(jiǎn)稱(chēng)CFU。通常用個(gè)數表示。
5.5測試方法
5.5.1方法概述：本測試方法利用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經(jīng)48小時(shí)以上培養，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落數，來(lái)評定潔凈環(huán)境內的活微生物數，并以此來(lái)評定潔凈室的潔凈度。
5.5.2所用的儀器和設備
5.5.2.1高壓消毒鍋：使用時(shí)參照文件GZ-ZL-SOP-066-00進(jìn)行操作。
5.5.2.2恒溫培養箱：必須定期對培養箱的溫度計進(jìn)行檢定。
5.5.2.3培養皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培養皿。使用前將培養皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘。
5.5.2.4培養基：普通營(yíng)養瓊脂培養基。將培養基加熱熔化，冷卻至約45℃在無(wú)菌操作條
件下將培養基注入培養皿，每皿約15m1。待瓊脂培養基凝固后，將培養基平皿放入30～35℃恒溫培養箱中培養數小時(shí)，若培養基平皿上確無(wú)菌落生長(cháng)，即可供采樣用，制備好的培養基平皿應在2～8℃的環(huán)境中存放。
5.5.3測試步驟
5.5.3.1采樣方法：將已制備好的培養皿放置在預先確定的取樣點(diǎn)，打開(kāi)培養皿蓋，使培養基表面暴露0.5小時(shí)，再將培養皿蓋上蓋后倒置。
5.5.3.2培養：全部采樣結束，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。在30～35℃培養，時(shí)間不少于48小時(shí)。每批培養基應有對照試驗，檢查培養基本身是否污染，可每批選定3只培養皿作對照培養。
5.5.3.3菌落計數：用肉眼直接計數，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落計數。
5.6注意事項
4.6.1測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
5.6.2采取一切措施防止人為對樣本的污染。
5.6.3對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。
5.6.4由于細菌種類(lèi)繁多，差別甚大，計數時(shí)一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀(guān)察，不要漏計培養皿邊緣生長(cháng)的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。
5.6.5采樣前應仔細檢查每個(gè)培養皿的質(zhì)量，如發(fā)現變質(zhì)、破損或污染的應剔除。
5.7測試規則
5.7.1測試狀態(tài)
5.7.1.1沉降菌測試前：被測試潔凈室（區）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、必須控制在規定值內。被測試潔凈室（區）已消毒。
5.7.1.2測試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，并在報告中注明測試狀態(tài)。
5.7.1.3測試人員：測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。靜態(tài)測試時(shí)，室內測試人員不得多于2個(gè)人。
5.7.2測試時(shí)間
5.7.2.1對單向流，如100級凈化房間內及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開(kāi)始。
5.7.2.2對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘開(kāi)始。
5.8沉降菌計數
5.8.1最少采樣點(diǎn)數目：可按表1確定。在滿(mǎn)足最少測點(diǎn)數的同時(shí)，還宜滿(mǎn)足最少培養皿數，見(jiàn)表2。
表1 最少采樣點(diǎn)數目
面積(m2)  潔凈度級別
  100  10000  100000  300000
＜10  2～3  2  2  2
≥10～＜20  4  2  2  2
≥20～＜40  8  2  2  2
≥40～＜100  16  4  2  2
≥100～＜200  40  10  3  3
注：表中的面積對于單向流潔凈室是指送風(fēng)面積，對于非單向流潔凈室是指房間面積。
表2 最少培養皿數
潔凈度級別  所需Φ90mm培養皿數（以沉降0.5小時(shí)計）
100  14
10000  2
100000  2
300000  2
5.8.2采樣點(diǎn)的布置：工作區測試點(diǎn)位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面）�？稍陉P(guān)鍵設備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測點(diǎn)，采樣點(diǎn)的布置應力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某 局部區域過(guò)于集中，某局部區域過(guò)于稀疏。
5.8.3記錄：測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差、測試狀態(tài)及測試數據。
5.8.4結果計算：用計數方法得出各個(gè)培養皿的菌落數。平均菌落數的計算見(jiàn)下式：
m1+m2+……+mn
平均菌落數m=n
式中：m為平均菌落數；m1為1號培養皿菌落數；m2為2號培養皿菌落數；mn為n號培養皿菌落數；n為培養皿總數。
5.8.5結果評定：用平均菌落數判斷潔凈室的空氣中的微生物。
5.8.6潔凈室（區）內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準。
5.8.7若某潔凈室（區）的平均菌落數超過(guò)評定標準，則必須對此區域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結果必須合格。

 

上一篇：大腸桿菌基因型及遺傳符號說(shuō)明（1）

下一篇：新型淋球菌培養基分離培養淋球菌的研究