厭氧菌培養基

一、液體培養基-石蕊牛乳培養基

［用途］

觀(guān)察細菌對牛乳的凝固及發(fā)酵作用

[配法]

新鮮脫脂牛乳1L , 20g / L 石蕊水溶液10ml（16g / L 溴甲酚紫乙醇溶液lml）( pH6.8 ）。

將新鮮牛乳隔水煮沸30min ，冷卻后置4 ℃ 冰箱內過(guò)夜。用吸管吸出下層乳汁，注入另一燒瓶?jì)�，棄去上層乳脂。加入石蕊溶液，分裝試管，滅菌113 ℃ 15min （或間歇滅菌）。置35℃ 培養24-48h ，若無(wú)細菌生長(cháng)，即可4 ℃ 冷藏備用

[用法]

將被檢菌接種于上述培養基中，若為芽胞梭菌，要在培養基內加入微量鐵末，于35℃ 培養8-24h 必要時(shí)可延長(cháng)至14 天。

[觀(guān)察結果]

產(chǎn)酸   因發(fā)酵乳糖而產(chǎn)酸，使指示劑變?yōu)榉奂t色

產(chǎn)氣   發(fā)酵乳糖同時(shí)產(chǎn)氣，可沖開(kāi)上面的凡士林

凝固   因產(chǎn)酸太多而使牛乳中的酪蛋白凝固

胨化   將凝固的酪蛋白繼續水解為胨，培養基上層液體變清，底部可留有未被完全胨化的酪蛋白

產(chǎn)堿   乳糖不發(fā)酵，因分解含氮物質(zhì)，生成胺及氨，培養基變堿，指示劑變?yōu)樗{色

不變   乳糖不發(fā)酵，指示劑無(wú)變化，與未接種管相同

白色   石蕊被還原成白色

 [質(zhì)量控制]

糞產(chǎn)堿桿菌，堿性反應，培養基呈藍色；變形桿菌，沒(méi)有變化，培養基仍呈紫色；產(chǎn)氣莢膜梭菌，急驟發(fā)酵，酸凝塊被氣體破壞

注：培養基在滅菌前加入凡士林，可觀(guān)察厭氧菌對牛乳中乳糖分解清況。若全脂牛奶需行脫脂處理，該培養基pH6.8，呈紫色

二、皰肉培養基

[用途]

主要用于梭菌屬的培養

[配方]

牛肉渣0.5g，牛肉浸液7ml（pH 7.6 ）。

將干燥的肉渣0.5g裝入15mm×150mm試管內，再加入pH7.6牛肉浸液7ml，兩者高度比例為1：2 。

在試管液面上加一層3-4mm厚度的融化凡士林。用橡皮塞塞緊，經(jīng)121 ℃ 滅菌15min 后，置4 ℃ 冰箱備。

[用法]

將各種采集的標本，在2h 內取0.5ml種入培養基底層，立即置35-37℃ 厭氧恒溫箱內進(jìn)行培養，2-7天觀(guān)察結果。若發(fā)現培養基有混濁、沉淀、粘性菌膜生長(cháng)現象，及培養物的臭味、肉渣的消化、變色、產(chǎn)氣等清況，用以判斷結果，并進(jìn)行涂片染色鏡檢及分離培養。一般在培養48h 以后開(kāi)始觀(guān)察，直至3 周，無(wú)細菌生長(cháng)，即可報告陰性

[質(zhì)量控制]

破傷風(fēng)桿菌或壞死梭桿菌48h 的培養物稀釋1 000 倍，接種0.01 ml，生長(cháng)良好

[保存]

置4 ℃ 冰箱內，數月有效

注：培養基的管口要密封，使用時(shí)將培養基置于水浴中煮沸10min ，以除去管內殘存的氧。為提高培養效果，在底層可放少許鐵粉作為還原劑