L 型細菌培養基

一、L 型細菌增菌培養基

（一）高滲液體L 型細菌菌增菌培養基

[用途]

可用作基礎培養。也用于血液、骨髓、胸水等標本進(jìn)行L 型細菌增菌培養

1 高滲鹽液體增菌培養基

[配法]

新鮮牛肉500g ，蛋白胨10g ，氯化鈉40g ，蒸餾水1L。

將新鮮牛肉去除脂肪、筋膜，切成小塊后用絞肉機絞碎，稱(chēng)取500g 加水1L 混合后置冰箱浸抱過(guò)夜；將肉浸液煮沸30min ，然后用麻布或絨布擠壓過(guò)濾；加入蛋白胨、氯化鈉后加熱溶解，并補足因蒸發(fā)而失去的水分，調整pH 至7.4-7.6 ；用濾紙過(guò)濾后分裝小瓶，121 ℃ 滅菌15-20 min。

2 高滲糖液體增菌培養基

[用途]

用于血液、骨髓、胸水等標本的L 型細菌增菌培養

[配法］

新鮮牛肉500g ，蛋白胨10g ，氯化鈉30g ，蔗糖150g ，蒸餾水1L 。

同上述高滲鹽培養基，唯高壓蒸汽滅菌時(shí)采用115 ℃ 20min ，以免蔗糖分解>

[用法]

取血液5ml及其它標本直接種于高鹽、高滲糖液體培養基，置35 ℃ 培養1-7天，每天觀(guān)察細菌生長(cháng)清況在上述增菌培養基上，L 型細菌呈顆粒狀生長(cháng)，顆�？烧掣接诠鼙诨虺恋碛诠艿�。

[質(zhì)量控制]

金黃色葡萄球菌L 型生長(cháng)良好

（二）L 型增菌培養基

[用途]

用于血液、腦脊液等體液標本中L 型細菌的增殖培養

[配法]

(1)牛肉浸液1L ，氯化鈉30-40g ，蛋白胨（優(yōu)質(zhì)）20g

(2)   牛肉浸液1L ，氯化鈉30g ，蔗糖150g ，蛋白胨20g

將各成分稱(chēng)量混合加熱溶解后，校正pH 至7.4-7.6 ，分裝培養瓶，每瓶15ml，121 ℃ 滅菌15min 備用。

[用法]

用無(wú)菌操作采集標本，立即接種于L 型細菌液體培養基和常規血液增菌培養基內，標本與培養基之比為1: 10 ，置35 ℃ 培養3-7天，逐日觀(guān)察。如發(fā)現培養液產(chǎn)生混濁、溶血、絮狀沉淀或瓶壁上附有粘性顆粒等細菌生長(cháng)現象，立即分離至L 型細菌分離平板上進(jìn)行鑒定。

[質(zhì)量控制]

用L 型細菌做生長(cháng)試驗，培養24-72h ，生長(cháng)良好。

[保存]

置4 ℃ 冰箱內使用1-2 周。

二、L 型細菌分離瓊脂培養基

[用途]

用于常見(jiàn)L 型細菌的分離培養

1.    Kaqan 分離平板

[配法]

牛肉浸液800ml ，氯化鈉50g，蛋白胨（Oxoid ) 20g ，瓊脂粉（Oxoid）8g ，血漿（人、馬、羊）200ml 將前四種成分稱(chēng)量混合加熱溶解，校正pH 至7.5 士0.1 ，分裝每瓶80ml，121 ℃ 滅菌15min 冷藏備用。

臨用時(shí)加熱溶解后，冷卻至56 ℃ 加入血漿20ml搖勻傾注平板。放在密封塑料袋中，置4 ℃ 冰箱備用。

注：血漿要預先滅菌處理，并經(jīng)56 ℃ 水浴滅活30min。

2 蚌埠85-7分離平板

[配法]

牛肉浸液1L ，氯化鈉40g ，蛋白胨30g ，明膠(生物試劑）30g ，瓊脂粉5-8g 。

將上述成分混合，加熱溶解，校正pH 至7.4-7.6 ，分裝后，經(jīng)121 ℃ 滅菌15 min 后傾注平板，置4 ℃ 冰箱備用。

[用法]

將血、腦脊液、尿等標本或增菌培養物滴種于平板約0.1ml，用L 型玻棒均勻涂開(kāi)，置35 ℃ 溫箱內啟蓋片刻，除去平板表面水分。在平板的邊端貼一片專(zhuān)用誘導紙片。覆蓋后置35 ℃ 10 ％二氧化碳環(huán)境下3-5 天逐日觀(guān)察。如有可疑L 型菌落，用低倍鏡檢查。在誘導區與非誘導區同時(shí)見(jiàn)到L 型菌落說(shuō)明標本內確有L 型細菌存在；若誘導區存在L 型菌落，而非誘導區無(wú)，則提示標本內有L 型細菌變異的趨向。

[質(zhì)量控制]

(1)細菌誘導試驗，在該平板上能誘導金黃色葡萄球菌Coweng I標準菌株出現L 型菌落和G 型菌落。

(2)   用L 型菌落作10^-7 稀釋?zhuān)��?SPAN lang=EN-US>0.1ml接種，經(jīng)培養獲得單個(gè)菌落和純培養。

［保存］

置4 ℃ 冰箱內，2 周用完

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