其它生化試驗培養基 （上）

［用途］
腸桿菌科細菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，如銅綠假單胞菌能還原硝酸鹽并可產(chǎn)生氮氣等，而有些細菌則無(wú)此特性，故可以此鑒別。

[配法]

蛋白胨10g ，硝酸鉀（分析純）2g ，蒸餾水1L 。

上述成分混合后，加熱溶解，校正pH 至7.4 。分裝試管每管約4ml，121 ℃ 滅菌15min 后備用。

附：試劑配制

甲液：對氨基苯磺酸0.8g , 5mol／L 冰醋酸100ml。

乙液：α-萘胺0.5g，5mol／L 冰醋酸溶液100ml

[用法]

將試驗菌接種培養基，經(jīng)35 ℃ 培養1-4 天，每天吸取培養液1ml，加入液甲、乙試劑各2 滴，陽(yáng)性者立刻或數秒鐘內顯紅棕色，陰性則不變色。

[質(zhì)量控制]

大腸埃希茵ATCC 25922 陽(yáng)性；硝酸鹽陰性不動(dòng)桿菌ATCC 15O38陰性。

注：

（1）因亞硝酸鹽在自然界中分布很廣，制備此培養基時(shí)所用器皿均要清洗干凈

（2）硝酸鹽試驗很敏感，未接種的硝酸鹽培養基應以試劑進(jìn)行檢查，確定培養基中是否存在亞硝酸鹽，從而排除假陽(yáng)性結果。

（3）本試驗在判定結果時(shí)，必須在加試劑后立即觀(guān)察，否則可因培養液迅速褪色而影響判定。

（4）沙門(mén)菌屬、假單胞菌屬的某些菌株，不但能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，而且還能使亞硝酸鹽繼續分解，生成氨和氮導致假陰性結果。

（5）若加入硝酸鹽試劑不出現紅色，需檢查硝酸鹽是否被還原�？捎谠�試管內再加入少許鋅粉，如出現紅色證明產(chǎn)生芳基肼，表示硝酸鹽仍然存在；如仍不產(chǎn)生紅色，表示硝酸鹽已被還原為氨和氮。亦可在培養基內加1 只小倒管，若有氣泡產(chǎn)生，表示有氮氣生成�？梢耘懦�假陰性。

2 亞硝酸鹽還原試驗培養基

［用途］

測定細菌還原亞硝酸鹽的能力。

[配方]

蛋白胨10g ，亞硝酸鉀2g ，酵母浸膏3g ，蒸餾水1L 。

將上述成分混合后，加熱溶解，調pH 至7.0。分裝試管每管約4 ml，加入小倒管1 只，121 ℃ 滅菌15min 后備用。

[用法]

將試驗菌接種于亞硝酸鹽培養基中，35 ℃ 培養24-48h 。24h 觀(guān)察倒管中有無(wú)氣泡出現，若有氣泡則為陽(yáng)性，無(wú)氣泡為陰性。48h 培養物檢測亞硝酸鹽存在與否。方法是在培養物內加入硝酸鹽還原試劑甲、乙液各0.5ml，如無(wú)紅色出現為陽(yáng)性，說(shuō)明亞硝酸鹽已被還原；反之為陰性，說(shuō)明培養基中尚有亞硝酸鹽存在。

[質(zhì)量控制]

銅綠假單胞菌ATCC 27853 陽(yáng)性；

硝酸鹽陰性不動(dòng)桿菌ATCC 15038陰性

[注意事項]

（1）因亞硝酸鹽在自然界中分布很廣，故在制備此培養基時(shí)所用器皿均要清洗干凈。

（2）未接種的亞硝酸鹽培養基應以硝酸鹽試劑進(jìn)行檢查，出現紅色反應方可使用

3.40 ％膽汁肉湯培養基

[用途]

用于鏈球菌屬的鑒別

[配法]

蛋白胨10g ，氯化鈉5g，牛肉浸膏5g，新鮮膽汁（豬、牛）400ml，蒸餾水600ml。

先將蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉加熱溶于蒸餾水中，調pH 至7.6 ，加入膽汁混勻后，分裝試管，每管3ml置115℃ 滅菌20min ，冷藏備用。取新鮮豬（牛）膽若干只，取膽汁用沙布過(guò)濾，裝于瓶中115 ℃ 滅菌20min ，冷卻后置4 ℃ 冰箱內，次日取出吸取上清液備用。

[用法]

取待檢標本接種肉湯，置35 ℃ 培養24-48h ，觀(guān)察有無(wú)細菌生長(cháng)。陽(yáng)性菌呈顆粒狀生長(cháng)，上液澄清，管底有沉淀；陰性菌則不生長(cháng)。

[質(zhì)量控制]

糞腸球菌ATCC 29212 陽(yáng)性；化膿鏈球菌ATCC 19615 陰性

注：若為初次觀(guān)察或培養基本身不易觀(guān)察，可轉種血瓊脂平板。

4 CAMP 試驗培養基

［用途］

檢查細菌產(chǎn)生和合成CAMP 因子的能力

[配法]

同血瓊脂平板

[用法］在血瓊脂平板上，先以金黃色葡萄球菌劃一橫線(xiàn)接種，再將被檢的B群鏈球菌與上述劃線(xiàn)作垂直劃線(xiàn)接種，兩者不能相交，相距0.5-1.0cm，于35 ℃ 培養18-24h 。在兩種細菌劃線(xiàn)之交接處出現箭頭形透明溶血區為陽(yáng)性；無(wú)箭頭狀溶血區為陰性。

[質(zhì)量控制]

無(wú)乳鏈球菌ATCC 13813 陽(yáng)性；糞腸球菌ATCC 29212 陰性。

注：

( l ) CAMP 為Christic , Atkins , Much-Petersen 四人名。

( 2 ）每批要用A 、D 群鏈球菌作陰性對照，用B 群鏈球菌作陽(yáng)性對照
( 3 ）用無(wú)菌9g / L 氯化鈉溶液洗滌3 次的羊紅細胞，制成5%含量的羊血瓊脂平板效果較好。

( 4 ）用葡萄球菌β-溶血素濾液做成紙條進(jìn)行試驗效果亦較佳。

4 硫化氫試驗培養基

［用途］

觀(guān)察細菌產(chǎn)生硫化氫的作用

檢測硫化氫產(chǎn)物有很多方法，以醋酸鉛法最為敏感。其適用于腸桿菌科以外的細菌所產(chǎn)生的少量硫化氫的檢測；而硫酸亞鐵法，為檢查硫化氫的常規培養基�，F將兩培養基分述如下：

（1）    醋酸鉛培養基

[配法]

蛋白胨10g ，胱氨酸0.1g ，硫酸鈉0.1g，蒸餾水1L

將上述成分加熱溶解，調整pH 為7.0-7.4 ，分裝試管，每管液體高度為4 -5cm , 115℃ 滅菌20min 。將濾紙剪成0.1-1.0cm 寬的紙條，用50-100g/L 醋酸鉛溶液浸透、烘干，置于皿內備用。

[用法]

將培養物接種上述培養基中，掛上紙條經(jīng)35 ℃ 孵育24h 。紙條變黑為陽(yáng)性，無(wú)變化為陰性。

(1)硫酸亞鐵瓊脂

[配法]

牛肉膏3g ，酵母浸膏3g ，蛋白胨10g ，硫酸亞鐵0.2g ，氯化鈉5g，硫代硫酸鈉0.3g ，瓊脂12g ，蒸餾水1L 。

將上述成分加熱溶解，分裝試管，每管3ml，115℃ 滅菌20min ，備用。

[用法]

將試驗菌株穿刺接種到培養基中，經(jīng)35 ℃ 培養24h 后，觀(guān)察結果。培養基呈黑色為陽(yáng)性，不變黑色為陰性。

[質(zhì)量控制]

鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC 13311 陽(yáng)性；宋內志賀菌ATCC 11060陰性

[保存]

置4 ℃ 冰箱，2 周內用完

5 奧普托欣敏感試驗紙片（Optochin sensitivity test）

[用途]

測定細菌對化學(xué)藥品奧普托欣敏感性。

[配法］

奧普托欣（Optochin ，乙基氫化羥基奎寧，ethylhydrocupreine hydrochloride ) 10mg 溶于10ml 蒸餾水中取1ml，加入200 片直徑6mm的滅菌紙片中，使其充分吸收，于37℃ 烘干備用。每片含Optochin 5μg 或將寬8mm的濾紙條浸于1 : 4 000 的Optochin 水溶液中，取出烘干備用。

[用法]

將被檢菌的肉湯培養物用無(wú)菌棉棒均勻涂布于血瓊脂平板上，取Optochin 紙片貼于平板上，35-37℃ 培養18-24h 。抑菌圈在18mm以上為敏感，無(wú)抑菌圈或抑菌圈＜10mm為耐藥。

[質(zhì)量控制]

肺炎鏈球菌（ATCC 10015）陽(yáng)性；化膿性鏈球菌（ATCC 19615）陰性。

注：如果分離物生長(cháng)稀少，則很難正確判定結果。其判定敏感的最低標準為抑菌環(huán)直徑15-16mm或更大；若＜15mm，應加做膽汁溶解試驗來(lái)確定。

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