微生物發(fā)酵生產(chǎn)的水平最基本的是取決于生產(chǎn)菌種的性能,但有了優(yōu)良的菌種還需要有最佳的環(huán)境條件即發(fā)酵工藝加以配合,才能使其生產(chǎn)能力充分。因此必須研究生產(chǎn)菌種的最佳發(fā)酵工藝條件,如營(yíng)養要求、培養溫度、對氧的需求等,據此設計合理的發(fā)酵工藝,使生產(chǎn)菌種處于最佳成長(cháng)條件下,才能取得優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的效果。
溫度對發(fā)酵的影響及控制
溫度對發(fā)酵的影響及其調節控制是影響有機體生長(cháng)繁殖最重要的因素之一,因為任何生物化學(xué)的酶促反應與溫度變化有關(guān)的。溫度對發(fā)酵的影響是多方面且錯綜復雜的,主要表現在對細胞生長(cháng)、產(chǎn)物合成、發(fā)酵液的物理性質(zhì)和生物合成方向等方面。
一、溫度對發(fā)酵的影響
(一)、溫度影響微生物細胞生長(cháng)
隨著(zhù)溫度的上升,細胞的生長(cháng)繁殖加快。這是由于生長(cháng)代謝以及繁殖都是酶參加的。根據酶促反應的動(dòng)力學(xué)來(lái)看,溫度升高,反應速度加快,呼吸強度增加,最終導致細胞生長(cháng)繁殖加快。但隨著(zhù)溫度的上升,酶失活的速度也越大,使衰老提前,發(fā)酵周期縮短,這對發(fā)酵生產(chǎn)是極為不利的。
(二)、溫度影響產(chǎn)物的生成量。
(三)、溫度影響生物合成的方向。例如,在四環(huán)類(lèi)抗生素發(fā)酵中,金色鏈絲菌能同時(shí)產(chǎn)生四環(huán)素和金霉素,在30℃時(shí),它合成金霉素的能力較強。隨著(zhù)溫度的提高,合成四環(huán)素的比例提高。當溫度超過(guò)35℃時(shí),金霉素的合成幾乎停止,只產(chǎn)生四環(huán)素。
(四)、溫度影響發(fā)酵液的物理性質(zhì)
溫度除了影響發(fā)酵過(guò)程中各種反應速率外,還可以通過(guò)改變發(fā)酵液的物理性質(zhì)間接影響微生物的生物合成。例如,溫度對氧在發(fā)酵液中的溶解度就有很大響,隨著(zhù)溫度的升高,氣體在溶液中的溶解度減小,氧的傳遞速率也會(huì )改變。另外溫度還影響基質(zhì)的分解速率,例如,菌體對硫酸鹽的吸收在25℃時(shí)最小。
二、影響發(fā)酵溫度變化的因素:
發(fā)酵熱就是發(fā)酵過(guò)程中釋放出來(lái)的凈熱量。
Q發(fā)酵=Q生物+Q攪拌-Q蒸發(fā)-Q輻射
1、 生物熱
是生產(chǎn)菌在生長(cháng)繁殖時(shí)產(chǎn)生的大量熱量。生物熱主要是培養基中碳水化合物、脂肪、蛋白質(zhì)等物質(zhì)被分解為CO2、NH3時(shí)釋放出的大量能量。主要用于合成高能化合物, 供微生物生命代謝活動(dòng)及熱能散發(fā)。菌體在生長(cháng)繁殖過(guò)程中,釋放出大量熱量。
生物熱的大小與菌種遺傳特性、菌齡有關(guān),還與營(yíng)養基質(zhì)有關(guān)。在相同條件下,培養基成分越豐富,產(chǎn)生的生物熱也就越大。
2、 攪拌熱
通風(fēng)發(fā)酵都有大功率攪拌,攪拌的機械運動(dòng)造成液體之間,液體與設備之間的摩擦而產(chǎn)生的熱。
Q攪拌=3600(P/V)
3600:熱功當量(kJ/(kW.h))
(P/V):通氣條件下單位體積發(fā)酵液所消耗的功率( kW/m3)
3、 蒸發(fā)熱
通入發(fā)酵罐的空氣,其溫度和濕度隨季節及控制條件的不同而有所變化?諝膺M(jìn)入發(fā)酵罐后,就和發(fā)酵液廣泛接觸進(jìn)行熱交換。同時(shí)必然會(huì )引起水分的蒸發(fā);蒸發(fā)所需的熱量即為蒸發(fā)熱。
蒸發(fā)熱的計算: Q蒸發(fā)=G(I2-I1), G:空氣流量,按干重計算,kg/h;
I1、I2:進(jìn)出發(fā)酵罐的空氣的熱焓量,J/kg(干空氣)
4、 輻射熱
由于發(fā)酵罐內外溫度差,通過(guò)罐體向外輻射的熱量。輻射熱可通過(guò)罐內外的溫差求得,一般不超過(guò)發(fā)酵熱的5%。輻射熱的大小取決于罐內外的溫差,受環(huán)境溫度變化的影響,冬天影響大一些,夏季影響小些。
5、顯熱 (Q顯)
排出氣體所帶的熱。
三、發(fā)酵熱的測定
①通過(guò)測量一定時(shí)間冷卻水的流量和冷卻水的進(jìn)、出口溫度,由下式計算出發(fā)酵熱:
Q發(fā)酵=G.CW.(t2-t1)/V
式中 G——冷卻水的流量(kg/h);CW——水的比熱[kJ/(kg•℃)];
t2 t1——分別為冷卻水的進(jìn)、出口溫度(℃); V--發(fā)酵液的體積(m3)。
②通過(guò)發(fā)酵罐溫度的自動(dòng)控制,先使罐溫達到恒定,再關(guān)閉自動(dòng)控制裝置,測定溫度隨時(shí)間上升的速率,按下式計算發(fā)酵熱
Q發(fā)酵=(MlCl+M2c2).S
Ml一系統中發(fā)酵液的質(zhì)量(kg);M2一發(fā)酵罐的質(zhì)量(kg);
Cl—發(fā)酵液的比熱[kJ/(kg•℃)];C2—發(fā)酵罐材料的比熱[kJ/(kg•℃));
S—溫度上升速率(℃/h)。
四、最適溫度的選擇與發(fā)酵溫度的控制
(一)溫度的選擇
最適溫度是一種相對概念,是指在該溫度下最適于菌的生長(cháng)或發(fā)酵產(chǎn)物的生成。選擇最適溫度應該考慮微生物生長(cháng)的最適溫度和產(chǎn)物合成的最適溫度。最適發(fā)酵溫度與菌種,培養基成分,培養條件和菌體生長(cháng)階段有關(guān)。
在抗生素發(fā)酵中,細胞生長(cháng)和代謝產(chǎn)物積累的最適溫度往往不同。例如,青霉素產(chǎn)生菌生長(cháng)的最適溫度為30℃,但產(chǎn)生青霉素的最適溫度是24.7℃。至于何時(shí)應該選擇何種溫度,則要看當時(shí)生長(cháng)與生物合成哪一個(gè)是主要方面。在生長(cháng)初期,抗生素還未開(kāi)始合成,菌絲體濃度很低時(shí),以促進(jìn)菌絲體迅速生長(cháng)繁殖為目的時(shí),應該選擇最適于菌絲體生長(cháng)的溫度。當菌絲體濃度達到一定程度,到了抗生素分泌期時(shí),此時(shí)生物合成成為主要方面,就應該滿(mǎn)足生物合成的最適溫度,這樣才能促進(jìn)抗生素的大量合成。在乳酸發(fā)酵中也有這種情況,乳酸鏈球菌的最適生長(cháng)溫度是34℃,而產(chǎn)酸的最適溫度不超過(guò)30℃。因此需要在不同的發(fā)酵階段選擇不同的最適溫度。
最適發(fā)酵溫度的選擇實(shí)際上是相對的,還應根據其他發(fā)酵條件進(jìn)行合理地調整,需要考慮的因素包括菌種、培養基成分和濃度、菌體生長(cháng)階段和培養條件等。例如,溶解氧濃度是受溫度影響的,其溶解度隨溫度的下降而增加。因此當通氣條件較差時(shí),可以適當降低溫度以增加溶解氧濃度。在較低的溫度下,既可使氧的溶解度相應大一些,又能降低菌體的生長(cháng)速率,減少氧的消耗量,這樣可以彌補較差的通氣條件造成的代謝異常。最適溫度的選擇還應考慮培養基成分和濃度的不同,在使用濃度較稀或較易利用的培養基時(shí),過(guò)高的培養溫度會(huì )使營(yíng)養物質(zhì)過(guò)早耗竭,而導致菌體過(guò)早自溶,使產(chǎn)物合成提前終止,產(chǎn)量下降。例如,玉米漿比黃豆餅粉更容易利用,因此在紅霉素發(fā)酵中,提高發(fā)酵溫度使用玉米漿培養基的效果就不如黃豆餅粉培養基的好,提高溫度有利于菌體對黃豆餅粉的利用。
因此,在各種微生物的培養過(guò)程中,各個(gè)發(fā)酵階段的最適溫度的選擇是從各方面綜合進(jìn)行考慮確定的。例如,在四環(huán)素發(fā)酵中,采用變溫控制,在中后期保持較低的溫度,以延長(cháng)抗生素分泌期,放罐前24h提高2—3℃培養,能使最后24h的發(fā)酵單位提高50%以上。又如,青霉素發(fā)酵最初5h維持30℃,6-35h為25℃,36--85h為20℃,最后40h再升到25℃。采用這種變溫培養比25℃恒溫培養的青霉素產(chǎn)量提高14.7%。
工業(yè)上使用大體積發(fā)酵罐的發(fā)酵過(guò)程,一般不須要加熱,因為釋放的發(fā)酵熱常常超過(guò)微生物的最適培養溫度,所以需要冷卻的情況較多。
(二)、溫度的控制
發(fā)酵罐:夾套(10M3以下);盤(pán)管(蛇管)(10M3以上)。