木腐菌菌種保藏（飼木法）技術(shù)規程

      木腐菌是一大類(lèi)能侵蝕、分解樹(shù)木或木材細胞，并吸收營(yíng)養和破壞結構，導致樹(shù)木和木材腐朽的真菌。在自然界中，木腐菌在森林物質(zhì)轉換和能量平衡方面發(fā)揮關(guān)鍵作用；此外，作為木材防腐技術(shù)研究的實(shí)驗材料之一，可用于防腐劑篩選、效果檢驗和防腐機理等研究。目前，對木腐菌的利用研究已擴大到生物制漿造紙、飼料蛋白、抗癌藥物和環(huán)境凈化等領(lǐng)域。

      制訂木腐菌菌種保藏技術(shù)規程，對于保持菌種的活力、菌種資源的規范和安全保存、科學(xué)研究及合理利用都具有重要意義和作用。

 

1   范圍

本規程規定了木腐菌菌種保藏（飼木法）的基本原則、技術(shù)要求及方法。

本規程適用于各類(lèi)木腐菌菌種的保藏。

2           術(shù)語(yǔ)與定義

木腐菌  wood-decay  fungi

木腐菌是一大類(lèi)能侵蝕或分解樹(shù)木或木材細胞，并吸收營(yíng)養和破壞結構，導致樹(shù)木

和木材腐朽的真菌。主要引起樹(shù)木白腐、褐腐、軟腐和木材表面變色等。

3           原理

木腐菌菌種的保藏原理，是通過(guò)低溫、干燥、隔絕空氣和斷絕營(yíng)養等手段，最大限度地降低菌株的代謝強度，抑制其生長(cháng)和繁殖，使其生命活動(dòng)降低到極低的程度或處于休眠狀態(tài)，從而保持菌種原有的性狀并延長(cháng)保藏時(shí)間。木腐菌菌種的保藏方法有斜面低溫保藏法、飼木低溫保藏法和液氮超低溫保藏法等。

木材具有木腐菌所必需的纖維素、半纖維素和木質(zhì)素等全營(yíng)養物質(zhì)，因此飼木法保藏有利于保持木腐菌原有的特性和腐朽活力，且保藏時(shí)間較長(cháng)和操作簡(jiǎn)單。但對飼木的選材較嚴，制作成本較高，保藏占用空間也較大。

4   技術(shù)要求

4.1   不同菌種應根據要求選擇適合的培養基進(jìn)行培養。

4.2    接種須無(wú)菌操作，避免雜菌污染。

4.3    定期檢查

4.4     保藏期間要定期檢查保藏菌種的冰箱溫度和濕度；檢查保藏器皿的棉塞有無(wú)生霉現象，如發(fā)現異常則立即取出該管重新純化，經(jīng)培養后補上空缺；在低倍解剖鏡下抽樣檢查有無(wú)螨蟲(chóng)等害蟲(chóng)，發(fā)現時(shí)須及時(shí)消除。

5方法與步驟

5.1 保藏設備和材料

4℃冰箱、超凈工作臺、高壓消毒器、菌種培養箱、三角瓶、馬尾松邊材、麥芽糖液、瓊脂粉等。

5.2 飼木的選擇

5-8年樹(shù)齡、健康無(wú)缺陷、無(wú)變色的馬尾松邊材。

5.3 飼木的制備

飼木取自原木段橫截面均勻分布處，各面要求平整、沒(méi)有缺陷，尺寸大小為5mm×5mm×5mm(紋理方向)。

5.4 麥芽糖（飴糖或馬鈴薯－蔗糖）瓊脂培養基制備

在300ml細口三角瓶中加入麥芽糖液（波美氏比重1.03）80ml,瓊脂1.5  ～  2.0％，瓶口塞棉塞并包防水紙，滅菌（0.1MPa，30min）。

(注：可用離心管等其它容器代替三角瓶，根據所選容器的容量，培養液的量也應做相應調整。)

5.5 接種培養

培養基冷卻凝固后，在無(wú)菌條件下接種木腐菌，置于培養箱內培養，溫度28±2℃，相對濕度75%，時(shí)間7--10天。

5.6 飼木的滅菌

在300ml細口三角瓶中加入飼木，數量約占瓶體的1/2，用蒸餾水將飼木表面均勻濕潤，瓶口塞棉塞，并包防水紙，滅菌（0.1MPa，60min）。

5.7 飼木接種

待飼木冷卻后，在無(wú)菌條件下將飼木放入已長(cháng)滿(mǎn)菌絲的三角瓶麥芽糖瓊脂培養基內，數量為三角瓶容積的1/2--1/3。

5.8 培養

將三角瓶置于培養箱或培菌室內培養，溫度28±2℃，相對濕度75%，時(shí)間為10-15天。

5.9   低溫保藏

待菌絲面積占飼木表面積的 3/4 左右時(shí)，將三角瓶置于 4℃的冰箱中保藏。

5.10 保藏時(shí)間

一般為3年以上。