微生物菌種常規保藏技術(shù)規程（3）

附    錄    B

液體石蠟保藏法

 

B.1   適用范圍

本方法適用于不能分解液體石蠟的酵母菌、某些細菌(如芽孢桿菌屬，醋酸桿菌屬等)和某些絲狀真菌(如青霉屬，曲霉屬等)。

B.2   原理

液體石蠟保藏法可作為定期移植保藏法的輔助方法。在液體石蠟覆蓋下，菌種的生物代謝受到抑制，細胞老化被推遲。此方法可阻止氧氣進(jìn)入，使好氣菌不能繼續生長(cháng)，也可防止因培養基的水分蒸發(fā)而引起的菌體死亡，達到延長(cháng)菌種保藏時(shí)間的目的。

B.3   技術(shù)要求

B.3.1    菌種培養參照附錄A

B.3.2    應選用優(yōu)質(zhì)化學(xué)純液體石蠟。

B.3.3    液體石蠟易燃，在對液體石蠟保藏菌種進(jìn)行操作時(shí)注意防止火災。

B.3.4    保藏場(chǎng)所應保持干燥，防止棉塞污染。

B.3.5    保藏期間應定期檢查，如培養基露出液面，應及時(shí)補充滅菌的液體石蠟。

B.4   方法與步驟

B.4.1   液體石蠟

將液體石蠟分裝加棉塞，用牛皮紙包好，0.1MPa滅菌30分鐘取出，置40℃恒溫箱蒸發(fā)水分，經(jīng)無(wú)菌檢查后備用。

B.4.2   斜面培養物的制備

參照附錄A，斜面宜短，不超過(guò)試管三分之一為宜。

B.4.3   灌注石蠟

無(wú)菌條件下將滅菌的液體石蠟注入剛培養好的斜面培養物上，液面高出斜面頂部1厘米左右，使菌體與空氣隔絕。

B.4.4   保藏

將注入石蠟油的菌種斜面直立存放于低溫(4℃-15℃)干燥處，保藏時(shí)間為2-10年不等。

B.4.5   恢復培養

恢復培養時(shí)，挑取少量菌體轉接在適宜的新鮮培養基上，生長(cháng)繁殖后，再重新轉接一次。