附 錄A
定期移植保藏法
A.1 適用范圍
本方法適用于大多數細菌和真菌。
A.2 原理
低溫條件下保藏可減緩微生物菌種的代謝活動(dòng)，抑制其繁殖速度，達到減少菌株突變，延長(cháng)菌種保藏時(shí)間的目的。
保藏培養基一般含較多有機氮，糖分總量不超過(guò)2%，既能滿(mǎn)足菌種培養時(shí)生長(cháng)繁殖的需要，又可防止因產(chǎn)酸過(guò)多而影響菌株的保藏。
A.3 技術(shù)要求
A.3.1 不同菌種應根據要求選擇合適的培養基。
A.3.2 接種時(shí)要求無(wú)菌操作，避免染菌。
A.3.3 保藏期間要定期檢查菌種存放的房間、冷庫、冰箱等的溫度、濕度，各試管的棉塞有無(wú)污染現象，如發(fā)現異常應取出該管，重新移植培養后補上空缺。
A.3.4 大量菌種同時(shí)移植時(shí)，各菌株的菌號、所用培養基要進(jìn)行核對，避免發(fā)生錯誤。
A.3.5 每次移植培養后，應與原保藏菌株和菌株的登記卡片逐個(gè)對照，檢查無(wú)誤后再存放。
A.3.6 斜面菌種應保藏相繼三代培養物以便對照，防止因意外和污染造成損失。
A.4 方法與步驟
A.4.1 培養基制備
A.4.1.1 器皿準備
培養基制備過(guò)程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、試管、培養皿、燒杯、吸管等，根據不同情況洗滌、干燥、包裝、滅菌后使用。
A.4.1.2 溶解培養基配料
先在燒杯中放適量水，按培養基配方稱(chēng)取各項材料，依次將緩沖化合物、主要元素、微量元素、維生素等材料加入水中溶解，最后加足水量。
A.4.1.3 調pH值
配料溶解后將培養基冷卻至室溫，根據要求加稀酸或稀堿調pH值。加酸或堿液時(shí)要緩慢、少量、多次攪拌，防止局部過(guò)堿或過(guò)酸而導致測量不準確和營(yíng)養成分被破壞。
A.4.1.4 加凝固劑
配制固體培養基時(shí)需加凝固劑，如瓊脂、明膠等。將凝固劑加入液體培養基中，加熱并不斷攪拌至融解，再補足所蒸發(fā)水分。
A.4.1.5 過(guò)濾分裝
在二層紗布中間夾入脫脂棉，將配好的培養基趁熱過(guò)濾并分裝，斜面培養基不宜超過(guò)試管高度的四分之一。分裝過(guò)程中勿使培養基沾污管口，以免弄濕棉塞造成污染。
A.4.1.6 包扎標記
將試管加棉塞，外面包扎一層牛皮紙或鋁箔并注明培養基名稱(chēng)及配制日期。
A.4.1.7 滅菌
根據要求將培養基滅菌。滅菌后擺放斜面時(shí)，斜面長(cháng)度不超過(guò)試管管長(cháng)的二分之一為宜。
A.4.1.8 無(wú)菌檢查
將滅菌的培養基放入培養箱中作無(wú)菌檢驗。
A.4.2 接種
A.4.2.1 斜面接種
A.4.2.1.1 點(diǎn)接
把菌種點(diǎn)接在斜面中部偏下方處。適用于擴散型生長(cháng)及絨毛狀氣生菌絲類(lèi)霉菌（如毛霉、根霉等）。
A.4.2.1.2 中央劃線(xiàn)
從斜面中部自下而上劃一直線(xiàn)。適用于細菌和酵母菌等。
A.4.2.1.3 稀波狀蜿蜒劃線(xiàn)法
從斜面底部自下而上劃"之"字形線(xiàn)。適用于易擴散的細菌，也適用于部分真菌。
A.4.2.1.4 密波狀蜿蜒劃線(xiàn)法
從斜面底部自下而上劃密"之"字形線(xiàn)。能充分利用斜面獲得大量菌體細胞，適用于細菌和酵母菌等。
A.4.2.1.5 挖塊接種法
挖取菌絲體連同少量瓊脂培養基，轉接到新鮮斜面上。適用靈芝等擔子菌類(lèi)真菌。
A.4.2.2 穿刺接種
用直接種針從原菌種斜面上挑取少量菌苔，從柱狀培養基中心自上而下刺入，直到接近管底（勿穿到管底），然后沿原穿刺途徑慢慢抽出接種針。適用于細菌和酵母菌等。
A.4.2.3 液體接種
挑取少量固體斜面菌種或用無(wú)菌滴管等吸取原菌液接種于新鮮液體培養基中。
A.4.3 培養
將接種后的培養基放入培養箱中，在適宜的條件下培養至細胞穩定期或得到成熟孢子。
A.4.4 保藏
A.4.4.1 保藏溫度和時(shí)間
培養好的菌種于 4℃－6℃保存，根據要求每 3－6 個(gè)月移植一次。對于某些菌種，如芽裂酵母，阿舒假囊酵母，棉病囊霉等，須 1－3 個(gè)月移植一次。
A.4.4.2 保藏濕度
用相對濕度表示，通常為 50%－70%。測量?jì)x表采用毛發(fā)濕度計或干濕球濕度計。
A.4.5 移植培養
將培養物轉接到另一新鮮培養基中，再在適宜條件下培養。
A.4.6 菌種復壯
菌種如有退化，應將退化的菌種引入原來(lái)的生活環(huán)境中令其生長(cháng)繁殖，通過(guò)純種分離，在宿主體內生長(cháng)等方法進(jìn)行復壯。
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