天然細胞培養基(三)

血清質(zhì)量的鑒定

1.理化性質(zhì)：如滲透壓、pH值、蛋白電泳圖譜、蛋白含量、激素水平、內毒素等。蛋白含量包括血清總蛋白含量（不低于35-45g/L）、球蛋白含量（應小于20g/L)、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一項非常重要的指標，血清中球蛋白主要是抗體，球蛋白含量越低血清質(zhì)量越高。血紅蛋白也是越低越好。

2.微生物檢測：包括細菌、真菌、支原體、病毒等。特別是對支原體、病毒的檢測，支原體是一種很小的微生物，可通過(guò)孔徑22u的濾膜。支原體、病毒污染在光學(xué)顯微鏡下難于察覺(jué)，細胞也能生長(cháng)繁殖，但會(huì )影響實(shí)驗結果。檢測支原體的方法很多，如培養法、PCR法、熒光染色法、電鏡觀(guān)察法等。

3.促生長(cháng)效果：這是血清重要的特性之一，應當以培養的細胞來(lái)檢測。有兩種方法：克隆形成率、貼瓶率測定法和連續傳代培養法。

（1）克隆形成率測定:一般以懸浮生長(cháng)的細胞為培養對象，按有限稀釋法做克隆化培養，將不同批號的血清配制成不同濃度的培養基，細胞也稀釋成不同濃度，接種到96孔板，每孔200ul，培養一定時(shí)間，統計有克隆生長(cháng)的孔，計算出百分比，再與對照的標準血清相比較，就可看出不同批號血清間的區別。比較低的濃度，更能觀(guān)察出血清質(zhì)量間的細微差別。

（2）貼瓶率測定:是以貼壁細胞為培養對象，將細胞稀釋至低密度，接種至平皿，每皿200或100個(gè)細胞，以不同濃度的血清培養基培養，培養一定時(shí)間后棄培養基，染色后統計集落數，計算出集落數占接種細胞數的百分比，同樣再與標準血清比較，判斷血清質(zhì)量高低。

（3）連續傳代培養法:是將細胞培養于3個(gè)一定體積的培養瓶中，待測血清配制為5％濃度，一般于第七天收集細胞，計數，取平均值，中間可以更換一次培養基。連續測試三個(gè)周期以上，觀(guān)察細胞生長(cháng)狀況，并將每次的計數結果與標準血清的測試結果比較。

4.對于使用者，判斷血清質(zhì)量先從外觀(guān)入手。好的血清應該是透明清亮，土黃色或棕黃色，無(wú)沉淀或極少沉淀，比較粘稠。如發(fā)現血清渾濁、不透明、含許多沉淀物，說(shuō)明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性；若血清呈棕紅色，說(shuō)明血清中的血紅蛋白含量太高，取材時(shí)有溶血現象；如果搖晃時(shí)感覺(jué)液體稀薄，說(shuō)明血清中摻入的生理鹽水太多。如果要進(jìn)一步了解血清的質(zhì)量，則應連續培養某些細胞，觀(guān)察細胞生長(cháng)狀況。

正確的使用及保存血清，才能使血清發(fā)揮應有的作用。

1.使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補體成分，避免補體對細胞產(chǎn)生毒性作用。血清經(jīng)過(guò)滅活也會(huì )損失一些對細胞有利的成分，如生長(cháng)因子，因此也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于培養，這樣做的前提是確認血清中不含補體成分。對于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細胞培養。

2.儲存條件：血清一般儲存于－20℃，同時(shí)應避免反復凍融。購買(mǎi)大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。融化時(shí)最好現置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長(cháng)時(shí)間存放，應盡快使用。

3.使用濃度：自從有了合成培養基，血清就是作為一種添加成分與合成培養基混合使用，使用濃度一般為5－20％，最常用是10％。過(guò)多血清容易使培養中的細胞發(fā)生變化，特別是一些二倍體的無(wú)限細胞系，迅速生長(cháng)之后容易發(fā)生惡性轉化。

采購血清時(shí)，最好先從供應商處索取樣品進(jìn)行試驗，選定一批后就要保留足夠使用6個(gè)月至1年的量，直至用另一批經(jīng)過(guò)預先試驗的樣品代替。