外周血培養基配制

一、配制用水培養基的大部分是水，所以水的質(zhì)量直接影響培養基的質(zhì)量。按Waymouth標準，水的電阻應為200萬(wàn)歐姆，一般實(shí)驗室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。

二、培養基培養基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗室使用的是RPMI-1640粉末培養基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO₃（或HCl）調pH至7.2-7.4，若pH值超過(guò)7.6或遠低于6.8，則大多數細胞不能生長(cháng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過(guò)處理。

三、血清培養中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無(wú)菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體，置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養細胞種類(lèi)、時(shí)間而定，一般用10-15%。由于血清成分復雜、條件不易控制，可選用無(wú)血清培養基。

四、抗菌素為防止培養時(shí)期細菌的污染，可在培養基中添加適當抗菌素，一般用量與組織細胞培養相同：卡那霉素100單位/毫升，或雙抗--青霉素100單位/毫升，鏈霉素100微克/毫升。

非增殖期的細胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細胞，但在離體培養過(guò)程中，在PHA的作用下，可被刺激轉化為淋巴母細胞而進(jìn)入有絲分裂。

經(jīng)實(shí)驗測定其分裂高峰分別于培養后44-48小時(shí)和68-72小時(shí)。

PHA有粘多糖，蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA激活的細胞數隨其濃度而增加，直至全部免疫活性細胞均被激活為止，但PHA濃度過(guò)高會(huì )引起凝集，一般采用4%濃度為好。