1．分析目標化合物
氮氨菲啶
2．儀器設備
帶可見(jiàn)分光光度檢測器的高效液相色譜儀。
3．試劑
甲醇
10％氯化鈉溶液
正己烷
乙酸乙酯
乙腈
甲酸銨： 特級
庚烷磺酸鈉： 1－庚烷磺酸鈉，特級
4．標準品
氯化氮氨菲啶：含氯化氮氨菲啶在99％以上，熔點(diǎn)為224℃～245℃
5．試驗溶液的制備
① 肌肉、脂肪、肝臟和腎臟：
肌肉：盡可能除去脂肪層，攪碎混合均勻后，稱(chēng)取其5.00g。
脂肪：盡可能除去肌肉層，攪碎混合均勻后，稱(chēng)取其5.00g。
肝臟、腎臟：攪碎混合均勻后，稱(chēng)取其5.00g。
加入15mL乙腈和15mL 0.25mol／L甲酸銨-甲醇溶液，攪拌均勻，以每分鐘3000轉離心分離5分鐘，乙腈-甲醇層移入磨口減壓濃縮器中。在沉淀中加入15mL乙腈和15mL 0.25mol／L甲酸銨-甲醇溶液，用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，與上述同樣條件進(jìn)行離心分離，合并乙腈-甲醇于磨口減壓濃縮器中，30℃以下除去乙腈和甲醇。
殘留物中加入15mL乙酸乙酯和15mL水，用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，棄去乙酸乙酯層。水層中加入15mL乙酸乙酯，用振蕩器激烈振蕩5分鐘，棄去乙酸乙酯層。水層中加入1g氯化鈉溶解，加入15mL乙腈，用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，乙腈層移入磨口減壓濃縮器中。水層加入15 mL乙腈，用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，合并乙腈層于磨口減壓濃縮器中，30℃以下除去乙腈。殘留物中加入1.0mL 0.25 mol／L甲酸銨-甲醇溶液溶解，此為試驗溶液。
② 奶
稱(chēng)取5.00g樣品，加入15mL乙腈和15 mL 0.25mol／L甲酸銨-甲醇溶液，用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，以每分鐘3000轉離心分離5分鐘，乙腈-甲醇層移入減壓濃縮器中。在沉淀中加入15mL乙腈和15mL 0.25mol／L甲酸銨-甲醇溶液，用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，與上述同樣條件進(jìn)行離心分離，合并乙腈-甲醇于磨口減壓濃縮器中，30℃以下除去乙腈和甲醇。殘留物中加入15mL乙酸乙酯和15mL水，用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，棄去乙酸乙酯層。水層中加入15mL乙酸乙酯，用振蕩器激烈振蕩5分鐘，棄去乙酸乙酯層。水層中加入1g氯化鈉溶解，加入15 mL乙腈，用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，乙腈移入磨口減壓濃縮器中。水層加入15 mL乙腈，用振蕩器激烈振蕩5分鐘，合并乙腈于磨口減壓濃縮器中，30℃以下除去乙腈，殘留物中加入1.0mL 0.25 mol／L甲酸銨-甲醇溶液溶解，此為試驗溶液。
6、操作方法。
a 定性試驗
按下列操作條件進(jìn)行試驗，試驗結果應與標準品的一致。
操作條件
柱填充劑：十八烷基甲硅烷基化硅膠（粒徑5μm）。
柱：內徑4.0～6.0mm、長(cháng)150mm不銹鋼管。
柱溫：40℃
檢測器：波長(cháng)380nm。
流動(dòng)相：乙腈：含0.005 mol／L庚烷磺酸鈉的0.03mol／L檸檬酸溶液(3：7)的混合溶液。調整流速使氮氨菲啶約10分鐘流出。
b 定量試驗
根據與a 定性試驗相同的操作條件下所得試驗結果，峰高法或峰面積法定量。
7．定量限
0.01mg/kg
8．注意事項
⑴ 試驗溶液的制備
提取和凈化使用的器皿必須是棕色的。
⑵ 標準溶液的制備
a. 標準品溶解在甲醇中作為標準原液（氯化氮氨菲啶108mg/L，氮氨菲啶100mg/L）。本標準原液在0℃～4℃保存，一周內穩定。
b. 用0.25 mol／L甲酸銨-甲醇溶液，將標準原液遞減稀釋?zhuān)鳛橹谱鳂藴是�(xiàn)用的標準溶液。
⑶ 其它
用本檢測方法檢出氮氨菲啶時(shí)，最好用帶紫外可見(jiàn)多波長(cháng)檢測器和質(zhì)量檢測器的高效液相色譜儀確證。
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