平酸菌及其檢驗

　　引起罐頭食品酸敗變質(zhì)而又不胖聽(tīng)（即產(chǎn)酸不產(chǎn)氣）的微生物在罐頭工業(yè)上稱(chēng)為平酸菌。它是需氧芽胞桿菌科中的一群高溫型，具有嗜熱、耐熱的特點(diǎn)，其適宜生長(cháng)溫度為45－60℃，最適生長(cháng)溫度為50－55℃，在37℃生長(cháng)緩慢，多數菌種在pH6.8-7.2生長(cháng)良好，少數菌種能在pH5.0生長(cháng)，廣泛分布于土壤，灰塵和各種變質(zhì)食品中。造成罐頭食品平蓋酸敗的細菌，從微生物學(xué)分類(lèi)來(lái)分，主要有二種：通常是嗜熱脂肪芽胞桿菌，凝結芽胞桿菌。

　　嗜熱脂肪牙胞桿菌：（Bacillus stearothermo philus)

　　革蘭氏陽(yáng)性菌，能運動(dòng)，周生鞭毛。芽胞橢圓形，亞端生或端生，通常使孢囊膨大，最高生長(cháng)溫度65－75℃。能夠葡萄糖產(chǎn)酸，水解淀粉。

　　凝結芽胞桿菌：（Bacillus Coagulans)

　　革蘭氏陽(yáng)性，能運動(dòng)，周生鞭毛。芽胞椰圓形或柱狀，一次端生或端生，偶爾中生，有些菌株孢囊膨大不明顯，有些菌株的孢囊大。最高生長(cháng)溫度55－60℃，最低生長(cháng)溫度15－25℃。接觸酶陽(yáng)性，葡萄糖產(chǎn)酸。

　　1．試樣制備：

　　罐頭樣品預先經(jīng)55℃保溫一周，然后按正常方法進(jìn)行開(kāi)罐，吸取內容物液體1毫升，如為固體內容物則取1克，以無(wú)菌手續接種于3＃培養基中，每罐接種2支。

　　2．增菌培養

　　接種試樣的3＃培養基試管，于55℃培養48小時(shí)，如發(fā)現指示劑由紫變黃即判斷為陽(yáng)性，同時(shí)進(jìn)行涂片鏡檢為芽胞桿菌（有時(shí)不易檢到芽胞），如陽(yáng)性需繼續培養48小時(shí)。

　　3．純分離培養

　　將陽(yáng)性培養基試管劃線(xiàn)接種于3＃培養基瓊脂平板55℃培養48小時(shí)，檢查有無(wú)可疑菌落（菌落黃色，周?chē)�有黃色環(huán)，中心色深不透明），如有可疑菌落則接種于普通瓊脂斜面和芽胞培養基斜面，55℃培養24小時(shí)，涂片鏡檢觀(guān)察有無(wú)芽胞，以及芽胞的形狀及位置，并同時(shí)以普通瓊脂斜面培養物進(jìn)行生化學(xué)試驗。

　　4．鑒別：

　　菌體形態(tài)：為革蘭氏陽(yáng)性芽胞桿菌。

　　生化反應：取上項斜面培養物按下列項目進(jìn)行鑒別。

　　平酸菌生化反應鑒別表

注：＋為產(chǎn)酸或陽(yáng)性，-為陰性
d＋：50－85％的陽(yáng)性
d－：15－－49％的陽(yáng)性
b：25－49％陽(yáng)性
45－55℃培養三天后無(wú)反應報告為陰性。

5．培養基的配方

　�、�3＃葡萄糖肉湯培養：
　　 蛋白胨 5克 葡萄糖 5克
　　 酵母浸膏 1克 牛肉膏 5克
　　 可溶性淀粉 1克 黃豆浸出液 50mL
　　 水1000mL 0.4%溴甲酚紫 4mL
　　 pH 7.0-7.2
　　 115℃高壓滅菌15min

　�、�3＃培養基瓊脂：

　　3＃葡萄糖肉湯 1000mL
　　瓊脂 18－20克
　　pH 7.2－7.4　　 121℃高壓滅菌15min

　�、鬯嵝砸入谁傊�

　　胰蛋白胨 5克 酵母膏 5克
　　葡萄糖 5克 K₂HPO₄ 4克
　　水1000mL 瓊脂 18－22克（15－20g)
　　瓊脂粉 12克
　　pH5.0 　121℃高壓滅菌15　min

　�、�7%NaCL肉湯

　　蛋白胨 5克 牛肉膏 3克
　　NaCL 70克 水 1000mL
　　pH7.0 121℃高壓滅菌15min

　�、菅堪�培養基

　　牛肉膏 10克 蛋白胨 10克
　　NaCL 5克 K₂HPO₄ 3克
　　(K₂HPO₄ 3H₂O 3.9克）
　　MnSO₄ 0.03克 瓊脂 25克
　　pH 7.2 121℃高壓滅菌15min

　�、轛－P培養基

　　蛋白胨 5克 葡萄糖 5克
　　K₂HPO₄ 5克 蒸餾水 1000mL
　　pH7.2 121℃高壓滅菌15min

　�、呶髅墒翔蹤此猁}瓊脂（檸檬酸鹽）

　　NaCL 5克 硫酸鎂 0.2克
　　磷酸銨(NH₄H₂PO₄）1克 磷酸氫二鉀K₂HPO₄）1克
　　枸櫞酸鈉 5克
　　瓊脂 20克 蒸餾水 1000mL
　　0.2％溴麝香草酚蘭酒精溶液 40mL
　　pH 6.8 121℃高壓滅菌15min

　�、嗤瘽h氏蛋白胨水

　　蛋白胨 10克 NaCL 5克
　　蒸餾水 1000mL pH 7.4
　　121℃高壓滅菌15min

　�、嵯跛猁}肉湯

　　牛肉膏 3克 蛋白胨 5克
　　硝酸鉀 1克 蒸餾水 1000mL
　　pH 7.0 121℃高壓滅菌20min(15min)