微生物生長(cháng)的檢測方法二

微生物的生長(cháng)伴隨著(zhù)一系列生理指標發(fā)生變化，例如酸堿度，發(fā)酵液中的含氮量，含糖量，產(chǎn)氣量等，與生長(cháng)量相平行的生理指標很多，它們可作為生長(cháng)測定的相對值。

1、 測定含氮量：

大多數細菌的含氮量為干重的12.5%，酵母為7.5%，霉菌為6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過(guò)氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合，在CO2氣流中加熱后產(chǎn)生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO2后即可測出N2的量。

2、 測定含碳量：

將少量（干重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或無(wú)機緩沖液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 0C下加熱30分鐘后冷卻。加水稀釋至5毫升，在580nm的波長(cháng)下讀取吸光光度值，即可推算出生長(cháng)量。需用試劑做空白對照，用標準樣品做標準曲線(xiàn)。

3、 還原糖測定法：

還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過(guò)還原糖的測定可間接反映微生物的生長(cháng)狀況，常用于大規模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長(cháng)的常規監測。方法是，離心發(fā)酵液，取上清液，加入斐林試劑，沸水浴煮沸3分鐘，取出加少許鹽酸酸化，加入Na2S2O3臨近終點(diǎn)時(shí)加入淀粉溶液，繼續加Na2S2O3至終點(diǎn)，查表讀出還原糖的含量。

4、 氨基氮的測定：

方法是，離心發(fā)酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02N的NaOH調色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應數刻，加入0.02N的使之變色，根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長(cháng)狀況。

5、 其他生理物質(zhì)的測定：

P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙酰胞壁酸）等含量以及產(chǎn)酸，產(chǎn)氣，產(chǎn)CO2（用標記葡萄糖做基質(zhì)），耗氧，黏度，產(chǎn)熱等指標， 都可用于生長(cháng)量的測定。也可以根據反應前后的基質(zhì)濃度變化，最終產(chǎn)氣量，微生物活性三方面的測定反映微生物的生長(cháng)。如我所在BMP-2的發(fā)酵生產(chǎn)上，隨時(shí)監測溶氧量的變化和酸堿度的變化，判斷細菌的長(cháng)勢。

微生物的檢測，其發(fā)展方向是快速，準確，簡(jiǎn)便，自動(dòng)化，當前很多生物制品公司利用傳統微生物檢測原理，結合不同的檢測方法，設計了形式各異的微生物檢測儀器設備，正逐步廣泛應用于醫學(xué)微生物檢測和科學(xué)研究領(lǐng)域。例如：

1、抗干擾培養基和微生物數量快速檢測技術(shù)結合解決了傳統微生物檢測手段不能解決的難題，為建立一套完整的抗干擾微生物檢測系統奠定了堅實(shí)的基礎。中科院廣州分院合作產(chǎn)業(yè)處提供的抗干擾微生物培養基，新型生化鑒定管，微生物計數卡，環(huán)境質(zhì)量檢測試劑盒等，可方便的用于多項檢測。

2、BACTOMETER 全自動(dòng)各類(lèi)總菌數及快速細菌檢測系統可以數小時(shí)內獲得監測結果，樣本顏色及光學(xué)特征都不影響讀數，對酵母和霉菌檢測同樣高度敏感原理是利用電阻抗法（IMPEDANCE TECHNOLOGY）將待測樣本與培養基置于反應試劑盒內，底部有一對不銹鋼電極，測定因微生物生長(cháng)而產(chǎn)生阻抗改變。如微生物生長(cháng)時(shí)可將培養基中的大分子營(yíng)養物經(jīng)代謝轉變?yōu)榛钴S小分子，電阻抗法可測試這種微弱變化，從而比傳統平板法更快速監測微生物的存在及數量。測定項目包括總生菌數，酵母菌，大腸桿菌群，霉菌，乳酸菌，嗜熱菌，革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌等。

這些儀器和設備的生產(chǎn)廠(chǎng)家很多，產(chǎn)品各異，在此不做一一介紹，具體可查看各公司的產(chǎn)品說(shuō)明。