磺胺二甲嘧啶檢測方法

1．分析目標化合物
    磺胺二甲嘧啶
2、儀器設備
    帶紫外分光光度檢測器的高效液相色譜儀。
3、試劑
    除下列試劑外，使用附錄2所列試劑。
    氧化鋁（中性）小柱（1850mg）：在內徑8～9mm的聚乙烯管中填充1850mg柱色譜用氧化鋁或填充具有相同分離特性的其他物質(zhì)。
4．標準品
    磺胺二甲嘧啶：含磺胺二甲嘧啶99％以上，熔點(diǎn)為198℃～201℃。
5．試驗溶液的制備
a：提取方法
① 肌肉、脂肪、肝臟和腎臟
    將樣品攪碎混合均勻后，稱(chēng)取5.00g，加入25mL乙腈和10g無(wú)水硫酸鈉，攪拌后，以每分鐘3000轉離心分離5分鐘，乙腈層移入100mL分液漏斗中。加入25mL乙腈飽和正己烷，用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，靜置，乙腈層移入磨口減壓濃縮器中。離心分離管的殘留物中加入25mL乙腈，激烈振蕩1分鐘后，按上述同樣的條件離心分離，合并乙腈層于分液漏斗中。用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，靜置，乙腈層移入磨口減壓濃縮器中，加入10mL正丙醇，40℃以下除去乙腈和正丙醇。殘留物中加入3mL乙腈：水（19：1）混合溶液溶解。
② 奶
    稱(chēng)取10.0g樣品，加入25mL乙腈和20g無(wú)水硫酸鈉，以每分鐘3000轉離心分離5分鐘，乙腈層移入100mL分液漏斗中。加入25mL乙腈飽和正己烷，用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，靜置，乙腈層移入磨口減壓濃縮器中。離心分離管的殘留物中加入25mL乙腈，激烈振蕩1分鐘，按上述同樣的條件離心分離，合并乙腈層于分液漏斗中。用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，靜置，乙腈層移入磨口減壓濃縮器中，加入10mL正丙醇，40℃以下除去乙腈和正丙醇。殘留物中加入3mL乙腈：水（19：1）混合溶液溶解。
b、凈化方法
    在氧化鋁（中性）小柱（1850mg）中注入10mL乙腈：水（19：1）混合溶液后，棄去流出液。柱中注入a 提取方法所得的溶液后，棄去流出液。注入10mL乙腈：水（17：3）混合溶液，收集流出液于磨口減壓濃縮器中，40℃以下除去乙腈和水。殘留物中加入1.0mL乙腈：0.025 mol／L磷酸二氫鈉溶液（3：17）混合溶液溶解，加入0.5mL乙腈飽和正己烷，以每分鐘3000轉離心分離5分鐘，棄去正己烷層，收集乙腈和磷酸二氫鈉溶液的混合溶液層，此為試驗溶液。
6、操作方法。
a 定性試驗
    按下列操作條件進(jìn)行試驗，試驗結果應與標準品的一致。
    操作條件
    柱填充劑：十八烷基甲硅烷基化硅膠（粒徑5μm）。
    柱：內徑4.0～6.0mm、長(cháng)150mm不銹鋼管。
    柱溫：40℃
    檢測器：波長(cháng)268nm。
    流動(dòng)相：乙腈：0.025 mol／L磷酸二氫鈉溶液（3：17）混合溶液。調整流速使磺胺二甲嘧啶約10分鐘流出。
② 定量試驗
    根據與a 定性試驗相同的試驗條件所得的試驗結果，峰高法或峰面積法定量。
7．定量限
    肌肉、脂肪、肝臟和腎臟：0.01mg/kg；乳：0.005 mg/kg 。
8．注意事項
    在5 試驗溶液的制備b凈化方法中用的氧化鋁（中性）小柱，預先用標準品確認其保持、溶出性能和凈化效果、回收率（90%～100%）時(shí)，確證肌肉、脂肪、肝臟及腎臟的定量限0.01mg/kg以下，奶的定量限0.005mg/kg以下。