苯并噻二唑檢測方法

1．  分析目標化合物

苯并噻二唑、苯并酸（苯并〔1,2,3〕噻二唑－7－羧酸）

2．儀器設備

帶紫外分光光度檢測器的高效液相色譜儀及液相色譜—質(zhì)譜儀。

3．試劑

除下列試劑外，使用附錄2所列試劑。
磷酸緩沖溶液(pH8)： 第1液：稱(chēng)取71.64g磷酸氫二鈉十二水和物，加水溶解至1,000mL 。第2液：稱(chēng)取31.21g磷酸二氫鈉二水和物，加水溶解至1,000mL。將473.5mL第1液與26.5mL第2液混和，加水至1,000mL。

4．標準品

苯并噻二唑：含苯并噻二唑99％以上，熔點(diǎn)為133℃。
苯并〔1,2,3〕噻二唑－7－羧酸(以下稱(chēng)”苯并酸”)： 含苯并酸99％以上，熔點(diǎn)為261℃～262℃。

5．試驗溶液的制備

a 苯并噻二唑試驗溶液
① 提取方法
(I) 將樣品粉碎后，過(guò)420μm 標準網(wǎng)篩，稱(chēng)取其10.0g，加入20mL磷酸緩沖溶液(pH8)，放置2小時(shí)。
加入100mL丙酮，攪拌3分鐘后，用涂布1cm 厚硅藻土的濾紙，抽濾至磨口減壓濃縮器中。取出濾紙上的殘留物，加入50mL丙酮和20mL磷酸緩沖溶液(pH8)，攪拌3分鐘后，按上述同樣操作，濾液合并于減壓濃縮器中，40℃以下濃縮至約50mL。
加入50mL 10%氯化鈉溶液，滴加約1mL 0.2mol／L 氫氧化鈉溶液，調整pH7.5～8.5 ，將溶液轉移至300mL分液漏斗中。用100mL乙醚：正己烷（1：1）混合溶液洗滌上述減壓濃縮器的茄型瓶，合并洗滌液于分液漏斗中。用振蕩器激烈振蕩5 分鐘后，靜置，乙醚和正己烷層移入300mL三角瓶中。水層中加入50mL乙醚：正己烷（1：1）混合溶液，按上述同樣操作，合并乙醚和正己烷層于上述三角瓶中。
(II) 加入適量的無(wú)水硫酸鈉，不時(shí)振搖、混合，放置15分鐘后，濾入磨口減壓濃縮器中。再用20mL乙醚：正己烷（1：1）混合溶液洗滌三角瓶，以此洗滌液洗滌濾紙上的殘留物，重復操作2次。合并兩次洗滌液于減壓濃縮器中，40℃以下除去乙醚和正己烷。
殘留物中加入30mL正己烷，轉移至100mL分液漏斗中。加入30mL正己烷飽和的乙腈，用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，靜置，轉移乙腈層于磨口減壓濃縮器中。正己烷層中加入30mL正己烷飽和的乙腈，按上述同樣操作，重復2次，合并乙腈層于減壓濃縮器中，40℃以下除去乙腈。殘留物中加入5mL乙醚：正己烷（3：17）混合溶液溶解。
② 凈化方法
在內徑15mm，長(cháng)300mm 色譜管中，注入5g懸浮在正己烷中的柱色譜用合成硅酸鎂，其上再加入約5g無(wú)水硫酸鈉，放出正己烷至柱上端余留少量正己烷。柱中注入a 提取方法所得的溶液后，加入50ml乙醚：正己烷(3：17)混合溶液，舍棄流出液。再加入150mL乙醚：正己烷（1：1）混合溶液，收集流出液于磨口減壓濃縮器中，40℃以下除去乙醚和正己烷。殘留物中加入乙腈：0.5％乙酸溶液的混合溶液溶解，準確至5mL，此為試驗溶液。
b 苯并酸試驗溶液
① 提取方法
按照a 苯并噻二唑試驗溶液中① 提取方法中（I）進(jìn)行操作所得的水層中，加入0.5mL磷酸，使之成酸性。加入50mL乙醚：正己烷(1：1)混合溶液，用振蕩器激烈振蕩5分鐘后，靜置，乙醚和正己烷層移入300mL三角瓶中。水層中加入50mL乙醚：正己烷(1：1)混合溶液，按上述同樣操作，合并乙醚和正己烷層于上述三角瓶中。加入適量的無(wú)水硫酸鈉，不時(shí)振蕩、混合，放置15分鐘后，過(guò)濾至磨口減壓濃縮器中。再用20mL乙醚：正己烷(1：1)混合溶液洗滌三角瓶,以此洗滌液洗滌濾紙上的殘留物，重復操作2次。合并2次洗滌液于減壓濃縮器中，40℃以下除去乙醚和正己烷。殘留物中加入5mL乙酸乙酯：甲醇(4：1)混合溶液溶解。
② 凈化方法
在內徑15mm，長(cháng)300mm色譜管中，注入5g懸浮在乙酸乙酯中的柱色譜用合成硅酸鎂，其上再加入約5g無(wú)水硫酸鈉，放出乙酸乙酯至柱上端余留少量乙酸乙酯。將① 提取方法中所得溶液注入柱中后，注入50mL乙酸乙酯：甲醇(4：1)混合溶液，舍棄流出液。再加入200mL乙酸乙酯：甲醇（7：3）混合溶液，收集流出液于磨口減壓濃縮器中，40℃以下除去乙酸乙酯和甲醇。殘留物中加入0.5％乙酸溶液：甲醇（3：1）混合溶液溶解，準確至2mL ，此為試驗溶液。

6．操作方法

a 定性試驗
按照下列操作條件進(jìn)行試驗。試驗結果必須與同樣操作條件下標準品的結果一致。
①苯并噻二唑的試驗
操作條件
柱填充劑：十八烷基甲硅烷基化硅膠 (粒徑5μm)
柱： 內徑4.6mm、長(cháng)150mm 不銹鋼管。
柱溫： 40℃
檢測器： 波長(cháng)254nm
流動(dòng)相： 乙腈：0.5％乙酸溶液(2：3)的混合溶液。調整流速使苯并噻二唑14～16分鐘流出。
②苯并酸的試驗
操作條件
柱填充劑：十八烷基甲硅烷基化硅膠(粒徑5μm)。
柱： 內徑4.6mm、長(cháng)150mm 不銹鋼管。
柱溫： 40℃    
檢測器：波長(cháng)235nm
流動(dòng)相：0.5％乙酸溶液：甲醇(3：1)混合溶液，調整流速使苯并酸24～26分鐘流出。
b 定量試驗
根據與a 定性試驗相同的操作條件下所得試驗結果，用峰高法或峰面積法定量，求出苯并噻二唑和苯并酸的含量，按照下式，求得含苯并酸的苯并噻二唑的含量。
苯并噻二唑(包括苯并酸)含量(mg/kg)＝A＋B×1.17
A：酸式苯并-S-甲基的含量(mg/kg)
B：酸式苯并酸的含量(mg/kg)
c 確證試驗
在與a 定性試驗相同的操作條件下，用液相色譜--質(zhì)譜儀測定。試驗結果必須與標準品的一致。此外，必要時(shí)用峰高法或峰面積法定進(jìn)行量。

7．定量限

0.01 mg/kg

8．注意事項

分別對苯并噻二唑和苯并酸定量，將苯并酸含量乘以系數換算成苯并噻二唑的含量，其和為分析值。