過(guò)夜菌液(overnight suspension culture)之培養

酒精燈

接種環(huán)

E. coli 菌株 （JM109）

LB 培養液：

1% （w/v） Bacto tryptone, 0.5% Bacto yeast extract, 1% NaCl,以5 N NaOH 調至pH 7.0 后，以濕熱法滅菌。

LB agar plates: LB 培養液中添加1.5% （w/v） Bacto agar.

1） 每組應有一支15 mL 試管，裝有2 mL LB 培養液，請寫(xiě)上JM109,并標明組別及日期。

2） 將接種環(huán)在酒精燈火焰上燒紅，環(huán)上方部份亦以火焰燒過(guò)。使接種環(huán)冷卻并刮下菌落，將培養皿蓋子置回。

3） 打開(kāi)試管蓋 （一手握住試管，并以拿著(zhù)接種環(huán)那只手的小指旋開(kāi)蓋子），將管口在酒精燈上過(guò)火。將沾有菌落的接種環(huán)伸入培養液中并輕敲管壁使菌落脫離。將管口再次在酒精燈上過(guò)火后，將蓋子置回。

4） 將接種環(huán)在火焰上燒紅滅菌后置回實(shí)驗桌上。

5） 將試管的蓋子稍微旋開(kāi)，并以膠帶固定管蓋，以免震蕩培養時(shí)蓋子松動(dòng)掉落。

6） 將試管置于37℃培養箱或水浴中震蕩培養過(guò)夜。

7） 將長(cháng)有JM109 之培養皿交回給助教。

◆ 與細菌接觸過(guò)的任何容器或培養基，使用后須經(jīng)過(guò)滅菌才可丟棄。 實(shí)驗中若不小心被菌液濺到，馬上用大量清水沖洗，并以70%酒精消毒。桌面或地面有菌液翻覆時(shí)，須以10%漂白水擦拭清理。