細菌培養技術(shù)（三）

細菌接種技術(shù)及生長(cháng)表現
由于細菌感染而致病的各種標本及帶菌者所需檢查的各種標本，往往并非單一的細菌，而混有其它非致病菌（人體正常菌群）。因此當對此標本須作出細菌鑒定時(shí)，就必須從標本中分離出致病菌，稱(chēng)為細菌分離培養技術(shù)。另外，對已得到可疑病菌進(jìn)行細菌鑒定及菌種保存等培養，稱(chēng)為純培養接種技術(shù)。
（一）平板劃線(xiàn)接種法（又稱(chēng)分離培養法）
平板分離劃線(xiàn)的方法較多，其中以分區劃線(xiàn)法與曲線(xiàn)劃線(xiàn)法較為常用。其目的都要使細菌呈現單個(gè)菌落生長(cháng)，便于同雜菌菌落鑒別�，F只介紹分區劃線(xiàn)法。

 

【材料】
1. 細菌：大腸桿菌、葡萄球菌18~24小時(shí)普通瓊脂斜面培養物。
2. 培養基：普通瓊脂平板。
3. 酒精燈，接種環(huán)等。
 【方法】
1. 右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰滅菌，待涼后，挑取大腸桿菌（或葡萄球菌）培養物少許。
2. 左手斜持瓊脂平板，皿蓋留在桌上，于火焰近處將菌涂于瓊脂平板上端，來(lái)回劃線(xiàn)，涂成薄膜（約占平板總表面積的1/10），劃線(xiàn)時(shí)接種環(huán)與平板表面成30~40º角，輕輕接觸，以腕力在平板表面行輕快地滑移動(dòng)作，接種環(huán)不應劃破培養基表面。
3. 燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留細菌，待冷（是否冷卻，可先在培養基邊緣處試觸，若瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試），從薄膜處取菌作連續平行劃線(xiàn)（見(jiàn)圖3），約占平板表面1/5左右，再次燒灼接種環(huán)，等三次平行劃線(xiàn)……以同樣方法作第四次，第五次劃線(xiàn)，將平板表面劃完。

4. 劃線(xiàn)完畢，蓋上平皿蓋，底面向上，用標簽或臘筆注明菌名檢驗號碼，接種者班級，姓名，組別等，置37℃孵育培養24小時(shí)后觀(guān)察結果（見(jiàn)圖4）。
（二）純培養細菌接種法
1. 斜面培養基接種法：用于培養，保存菌種及其它實(shí)驗用。
  【材料】
（1）大腸桿菌，葡萄球菌18~24小時(shí)瓊脂斜面培養物。
（2）普通瓊脂斜面培養基。
（3）接種環(huán)，接種針，酒精燈等。
  【方法】
（1）取一支斜面培養基及一支純菌種管，并排傾斜放在左手四指中拇指壓住并以手掌支住兩試管底部。右手將白金環(huán)于火焰上滅菌、冷卻。并拔起兩試管的棉塞。（勿放置桌上，如棉塞太緊時(shí)應預先松動(dòng)）。
（2）試管口部于火焰上往返通過(guò)2~3次滅菌，將滅菌白金環(huán)伸入有菌試管中，取少量細菌（一般應從斜面底部沾�。�，然后小心移至準備接種的試管中。
（3）接種方法是自管底向上連續平劃線(xiàn)，若以保存菌為目的時(shí)可自管底上劃一粗直線(xiàn)即可。
（4）取出接種環(huán)，將試管上部再經(jīng)火焰滅菌，塞好棉塞，接種環(huán)滅菌后放回原處。
（5）若自平皿培養物中取菌時(shí)，只應沾取一個(gè)單個(gè)菌落。
（6）接種菌應作好標記，標明菌種名稱(chēng)，日期等，置37℃溫箱中培養，次日觀(guān)察結果。
2. 液體培養基接種法：用于增菌及鑒定細菌生長(cháng)特點(diǎn)，如表面生長(cháng)，沉淀生長(cháng)，均勻混濁生長(cháng)等。
  【材料與方法】
操作技術(shù)基本與上法相同，只是接種時(shí)應將沾菌之接種環(huán)沿接近液體表面之管內壁輕輕摩擦（勿用力振蕩）使細菌混入培養基內，置37℃溫箱中培養，次日觀(guān)察結果。
3. 半固體培養基穿刺培養法
用于保存菌種及間接觀(guān)察細菌之動(dòng)力（無(wú)動(dòng)力之細菌僅沿穿刺線(xiàn)生長(cháng)，清晰可見(jiàn)；有動(dòng)力的細菌使培養基呈現混濁樣，穿刺線(xiàn)甚至難以看出）。
用無(wú)菌操作技術(shù)，滅菌穿刺針沾取細菌后，垂直刺入半固體培養基中央直達近管底處，再沿原穿刺線(xiàn)抽出即可，置37℃溫箱培養，次日觀(guān)察結果。