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      首頁(yè) > 微生物知識->細菌基本知識和檢測方法->蘇云金桿菌的部分生化試驗鑒定

    蘇云金桿菌的部分生化試驗鑒定



    錄入時(shí)間:2010-3-11 10:28:42 來(lái)源:青島海博

    一、目的要求:
    本實(shí)驗是通過(guò)簡(jiǎn)單的生化測定來(lái)了解蘇云金桿菌的生化鑒定技術(shù)。
    鑒定蘇云金桿菌的生化指標是:V、P反應,卵磷脂酶,蛋白水解,吐溫酶,水楊素,七葉靈、蔗糖、甘露糖、表膜、酶、淀粉、幾丁質(zhì)酶、精氨酸脫羥酶等。
    二、實(shí)驗材料:
    1、  天平 2、電爐 3、藥勺4、量筒5、燒杯6、pH試紙7、高壓鍋(手提式)8、接種環(huán)
    三、實(shí)驗內容:
    1、糖利用:
    蛋白胨                                     1%
    瓊脂                                        2%
    蔗糖(甘露糖)                         1%(水楊素為0.5%)
    1%酸性復紅水溶液                     0.5%
    蛋白胨加熱溶于水中,加入酸性復紅水溶液。分別加入一種糖加熱溶解,以不加糖的蛋白胨作對照。分裝試管,調pH至7.58磅滅菌30分鐘。
    接種后于30℃恒溫培養檢查產(chǎn)酸情況,若培養基變紅者為正反應。
    2、七葉靈利用:
    牛肉膏                                1%
    七葉靈                                0.5%
    瓊脂                                  2%
    另配5%三氯化鐵水溶液?jiǎn)为殰缇。培養基溶后,先將三氯化鐵每皿滴入2滴,后倒平板混勻。凝固后電接菌種,30 ℃培養3-5天。菌苔周?chē)霈F深褐色區為陽(yáng)性反應。
    3、V、P反應:
       蛋白胨5克  葡萄糖5克  NaCl 5克  蒸餾水 1000毫升
    分裝試管   8磅30分鐘滅菌
    接菌后于37 ℃培養24小時(shí),每管加入4%KOH溶液10-20滴,再加等量的5%的一萘酚乙醇水溶液后,用力振蕩。然后置37 ℃下保溫0.5小時(shí)。培養物出現紅色即為V、P正反應,并設未接種的試管為對照。
     4、淀粉水解試驗:
    牛肉膏 5克  NaCl 5克  可熔性淀粉 5克  瓊脂  10克  蒸餾水 1000毫升 
    將試驗菌點(diǎn)種于平板上,徒長(cháng)出菌落后,收Lugoc氏碘液傾注于平板表面,菌落四周有透明圈者為陽(yáng)性放應。
    5、菌膜形成試驗:
       肉湯試管接種,30。C靜止培養24小時(shí)后觀(guān)察菌膜形成情況及搖動(dòng)后膜破粹情況。
    6、卵磷脂酶試驗
    蛋白胨1%   酵母膏  0.3%  NaCl  0.5%  瓊脂 2%  卵黃2-3%  pH 7-7.2
    用75%酒精將新鮮雞蛋進(jìn)行表面消毒,并用經(jīng)火焰滅菌的鑷子將蛋兩端各打一個(gè)孔,傾去蛋清,然后用無(wú)菌5ml吸管取出卵黃,加至觸化后冷卻至50。C左右的培養基中,使卵黃含量為培養基總體積的2~3%;靹蚝蟮蛊桨,點(diǎn)接菌種24小時(shí)后觀(guān)察,菌液邊緣出現混濁圈者表示卵鱗酯酶為陽(yáng)性。

     

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