醬油—菌落總數的測定—平板計數法

1  范圍

本方法采用平板計數法測定餐桌醬油中菌落總數的含量。

本方法適用于餐桌醬油中菌落總數的測定，以cfu/mL 報告其結果，測定值保留兩位有效

數。

2  原理

樣品經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養后（如培基成分、培養溫度和時(shí)間、PH、需氧性質(zhì)等） ，

所得1 mL 檢樣中所含菌落的總數。本方法規定的培養條件下所得的結果，只包括一群在營(yíng)養瓊脂上生長(cháng)發(fā)育的嗜中溫性需氧的菌落總數。

3  試劑

3.1  氫氧化鈉溶液，150g/L

3.2  生理鹽水

3.3  乙醇溶液，750g/L

3.4  營(yíng)養瓊脂培養基：將10g蛋白胨、3g 牛肉膏、5g 氯化鈉溶解于 1000mL 蒸餾水中，加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，校正PH至7.2～7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化。分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。

4   儀器

4.1   溫箱：36±1℃

4.2   恒溫水�。�46±1℃

5   操作步驟

5.1  樣品處理：用點(diǎn)燃的酒精棉球燒灼瓶口滅菌，用石碳酸紗布蓋好，再用滅菌開(kāi)瓶器啟開(kāi)后進(jìn)行檢驗。

5.2  檢樣稀釋及培養

5.2.1   以無(wú)菌操作，吸取醬油樣品25 mL，加入裝有225mL滅菌蒸餾水的滅菌玻璃瓶?jì)冉?jīng)充分振搖做成1:10 的均勻稀釋液。

5.2.2   用 lmL 滅菌吸管吸取 1:10 稀釋液 lmL，沿管壁徐徐注入含有 9mL 滅菌生理鹽水的試管內(注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液)，振搖試管，混合均勻，做成 1:100 的稀釋液。

5.2.3  另取 lmL滅菌吸管，按 5.2.2操作順序，做10 倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，

即換用1 支lmL滅菌吸管。

5.2.4   根據食品衛生標準要求或對標本污染情況的估計，選擇2 一 3 個(gè)適宜稀釋度，分別在做10 倍遞增稀釋的同時(shí)，即以吸取該稀釋度的吸管移 lmL 稀釋液于滅菌平皿內，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。

5.2.5   稀釋液移入平皿后，應及時(shí)將涼至 46℃營(yíng)養瓊脂培養基(可放置于 46±1℃水浴保溫)注入平皿約 l5mL，并轉動(dòng)平皿使混合均勻。同時(shí)將營(yíng)養瓊脂培養基傾入加有lmL稀釋液的滅菌平皿內作空白對照。

5.2.6  待瓊脂凝固后，翻轉平板，置36士 l℃溫箱內培養 48 士 2h。

5.3   菌落計數方法

    做平板菌落計數時(shí)，可用肉眼觀(guān)查，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的

菌落數后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數。

5.4   菌落計數的報告

5.4.1 平板菌落數的選擇

    選取菌落數在30 一 300 之間的平板作為菌落總數測定標準。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板，應采用兩個(gè)平板平均數，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(cháng)時(shí)，則不宜采用，而應以無(wú)片狀菌落生長(cháng)的平板作為該稀釋度的菌落數，若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個(gè)平板后乘2以代表全皿菌落數。平皿內如有鏈狀菌落生長(cháng)時(shí)(菌落之間無(wú)明顯界線(xiàn))，若僅有一條鏈，可視為一個(gè)菌落;如果有不同來(lái)源的幾條鏈，則應將每條鏈作為一個(gè)菌落計。

5.4.2  稀釋度的選擇

5.4.2.1  應選擇平均菌落數在30 一 300 之間的稀釋度，乘以稀釋倍數報告之。

5.4.2.2  若有兩個(gè)稀釋度，其生長(cháng)的菌落數均在30 一 300 之間，則視兩者之比如何來(lái)決定。若其比值小于或等于2，應報告其平均數;若大于 2 則報告其中較小的數字。

5.4.2.3 若所有稀釋度的平均菌落數均大于300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。

5.4.2.4 若所有稀釋度的平均菌落數均小于30， 則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。                                                                          

5.4.2.5 若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(cháng)，則以小于1 乘以最低稀釋倍數報告之。

5.4.2.6 若所有稀釋度的平均菌落數均不在30一300之間， 其中一部分大于300或小于30時(shí)，則以最接近30 或300 的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。

5.4.3  菌落數的報告

    菌落數在100 以?xún)葧r(shí)，按其實(shí)有數報告，大于100 時(shí)，采用二位有效數字，在二位有效數字后面的數值，以四舍五入方法計算。為了縮短數字后面的零數， 也可用10的指數來(lái)表示。