1 介紹
濃縮果汁中有時(shí)含有導致腐敗的芽孢菌，耐酸耐熱菌，也叫TAB，它們的特點(diǎn)是：
1） 能耐熱的孢子；
2） 能耐果汁中的酸；
3） 能在含有很少量的氧中生長(cháng)；
這個(gè)程序描述了檢驗濃縮蘋(píng)果清汁（比如蘋(píng)果）的TAB的檢驗方法。
2 設備和試劑
2.1 設備
2.1.1 三角瓶：1000ml。
2.1.2 滅菌的99ml的去離子水的稀釋空白。
2.1.3 磁力攪拌棒。
2.1.4 帶有攪拌器的加熱盤(pán)。
2.1.5 塑料注射器：10ml。
2.1.6 注射用的濾膜裝置(0.45um)。
2.1.7 滅菌培養皿：90mm。
2.1.8 恒溫水浴鍋：74-76°C。
2.1.9 恒溫培養箱：43±1℃。
2.1.10 廣口滅菌吸管：25ml。
2.1.11 一次性的帶有螺旋蓋子的試管。
2.1.12 可以無(wú)菌過(guò)濾0.45um的過(guò)濾裝置。
2.1.13 異丙基酒精。
2.2 試劑
2.2.1 酵母粉(VWR DF0127-15)
2.2.2 蛋白胨(VWR DF0118-15)
2.2.3 瓊脂粉(VWR DF0145-17)
2.2.4 葡萄糖(VWR EM-DX0145-11)
2.2.5 吐溫80(VWR JTX 257-7)
2.2.6 蘋(píng)果酸(VWR JTP494-7)
3 操作步驟
3.1 配制K氏培養基，在一個(gè)1升的燒瓶中，加入：
3.1.1 去離子水：500-mL
3.1.2 酵母粉： 1.25-g
3.1.3 蛋白胨： 2.50-g
3.1.4 瓊脂粉： 7.50-g
3.1.5 葡萄糖： 0.50-g
3.1.6 吐溫80：0.50-mL
3.1.7 磁力攪拌裝置
或者直接購買(mǎi)K氏培養基，按照廠(chǎng)家的說(shuō)明配制。
3.2 加熱使藥品充分溶解。
3.3 輕輕的蓋上燒瓶的塞子，將培養基在15磅下高壓滅菌25分鐘。
3.4 在一個(gè)小燒杯中加入1.0克的蘋(píng)果酸和10 ml去離子水，攪拌使其溶解。
3.5 將蘋(píng)果酸的溶液抽入10ml的一次性塑料注射器中。
3.6 在塑料注射器的末端進(jìn)行無(wú)菌的濾膜過(guò)濾。
3.7 K氏培養基滅菌結束后，將蘋(píng)果酸的溶液用注射器無(wú)菌的濾膜過(guò)濾到K氏培養基中，充分搖勻。
3.8 當培養基冷卻到大約50°C時(shí)，將酸化后的培養基倒入到一次性培養皿中。
3.9 等待培養基凝固后，在≤5°C的條件下冷藏，可以保存60天。
3.2 采樣
3.2.1 樣品不必采取無(wú)菌的方式采集，但是要防止和其他樣品的交叉污染。
3.2.2 采樣的容器必須是滅菌的。
3.2.3 取樣時(shí)，從大桶中取樣出來(lái)所用的器具應先用水清洗，然后在200ppm的有效氯中浸泡后，才可以浸入大桶中取樣。
3.3 熱沖擊
3.3.1 調節水浴鍋到74-76°C。
3.3.2 用一個(gè)廣口吸管吸取1ml樣品于帶有蓋子的試管中，準備測試。
3.3.3 加入10ml滅菌水。
3.3.4 緊緊的蓋上試管的蓋子。
3.3.5 將此樣品放到水浴鍋中，用計時(shí)器計時(shí)13分鐘。
4 數據分析
4.1 將熱沖擊后的樣品加入到99ml的滅菌水空白中，充分混勻。
4.2 用一次性的0.45um的濾膜過(guò)濾稀釋液。
4.3 移開(kāi)過(guò)濾器的上部。
4.4 將鑷子的尖端在酒精中浸后，點(diǎn)燃滅菌。
4.5 用這個(gè)滅菌的鑷子將濾膜夾到K氏培養基上。
4.5 輕敲濾膜使它緊貼到K氏培養基上。
4.6 蓋上培養皿的蓋子，把培養皿包起來(lái)，以減少培養基的干燥。
4.7 在培養箱底部的架子上放一盤(pán)去離子水，以保證培養箱內潮濕防止培養基干裂。
4.8 放置培養皿時(shí)，將培養皿的蓋子朝下。
4.9 在43°C 下培養 5天，記錄濾膜上的菌落數，它們是1ml的濃縮果汁樣品的TAB數目。
參考資料：Coca Cola公司耐熱耐酸菌的檢測。
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