來(lái)自人傳代細胞系的細小病毒 關(guān)于傳代細胞系可能有本屬病毒污染的問(wèn)題，是Hallauer等在研究黃熱病病毒細胞培養時(shí)首先發(fā)現的，由于它關(guān)系到細胞系能否長(cháng)期穩定傳代和使用的一系列問(wèn)題，以致引起了有關(guān)學(xué)者的重視。尤其在病毒學(xué)試驗中，經(jīng)常使用傳代細胞系，因此，有必要對這一問(wèn)題作簡(jiǎn)要介紹。 Hallauer等從1960年到1971年的11年間，對從歐洲某些實(shí)驗室搜集來(lái)的43株人傳代細胞系，進(jìn)行了病毒分離試驗。由于細胞系的帶毒往往是潛伏狀態(tài)的，細胞培養物并不經(jīng)常產(chǎn)生細胞病變或者僅出現難以辨認的輕微退行性變化，給病毒的識別和分離帶來(lái)困難。因此，除部分病毒是通過(guò)細胞病變識別的以外，大多數是以檢出血凝素為先導，確定有紅細胞凝集性因子存在，然后再進(jìn)行病毒的分離和鑒定。由于病毒主要與細胞結合存在，為了把病毒從細胞中提取出來(lái)，Hallauer等應用堿性等滲緩沖液(02M甘氨酸緩沖液，pH90)對細胞單層進(jìn)行浸泡以提取病毒：首先倒出被檢細胞瓶中的維持液，以Hanks液清洗一次，然后加入上述堿性緩沖液覆蓋細胞單層，室溫浸泡30分鐘，倒出上清液，即為含病毒的細胞浸出液。應用PBS對浸出液作倍倍稀釋?zhuān)缓蠹尤?8%豚鼠或人O型紅細胞懸液，混勻，室溫靜置1～2小時(shí)判定。凝集價(jià)可高達千倍到萬(wàn)倍。另外，由于病毒在堿性環(huán)境中容易從細胞中釋放，所以簡(jiǎn)便的辦法是在換液時(shí)提高使用維持液的pH(76～78)，培養數天后，即可直接取維持液作血凝素檢查，但它不如細胞浸出液的血凝效價(jià)高。通過(guò)這種方法，Harllauer等成功地檢出了細胞系中污染的細小病毒，而且檢出率之高，達到了驚人的程度(見(jiàn)表37-3)。
上述學(xué)者從43株細胞中分出病毒38株，通過(guò)血清學(xué)檢查，分別屬于3個(gè)血清型。其中以KBSH為最多，它與豬細小病毒(PPV)有共同抗原關(guān)系，一般認為兩者為同一種病毒，并推測這種病毒很可能來(lái)源于組織培養中的生物制劑(如用豬胰臟制取的胰蛋白酶)。Croghan等就曾從這種蛋白酶中分離出過(guò)KBSH。其它兩個(gè)型(TVX、LuⅢ)，與本屬其它病毒沒(méi)有共同抗原關(guān)系，在自然界也找不到宿主，來(lái)源尚不清楚。 這3種病毒無(wú)論在形態(tài)、結構、理化學(xué)和生物學(xué)特性等方面，都與本屬病毒一致，無(wú)明顯的獨特性質(zhì)。它們都具有較寬廣的細胞感染范圍，幾乎能在各種人傳代細胞系增殖(同樣要求處于有絲分裂過(guò)程中的細胞)。對多種類(lèi)型的紅細胞有凝集作用，而且對溫度無(wú)嚴格要求(4～37℃均可)。人工感染實(shí)驗動(dòng)物時(shí)，只LuⅢ對新生倉鼠有致病性。 據上述學(xué)者的經(jīng)驗，多數傳代細胞系的帶毒呈潛伏狀態(tài)，可連續數月到數年不被覺(jué)察。但在細胞培養條件驟變、運輸、郵寄或長(cháng)期低溫保存后重新培養時(shí)，才突然發(fā)現異常，甚至因病毒量激增而形成明顯的細胞病變，直到細胞系丟失。但更重要的是，研究者使用被病毒污染的細胞，可能得出錯誤的數據或結論。
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