犬細小病毒(Canineparvovirus)同義名：犬細小DNA病毒〖HT5SS〗 犬細小病毒(CPV)于1978年同時(shí)從澳大利亞(Kelly)、加拿大(Thomson等)患腸炎的病犬中分離獲得，是繼1967年Binn等從犬分離的第二種細小病毒。它與Binn早期從健康犬分離的犬極小病毒(Minulevirusofcanine，MVC)在致病性上顯著(zhù)不同，抗原性上也有明顯差異。CPV可引起犬出血性腹瀉和心肌炎，并使白細胞大量減少，在幼犬中的發(fā)病率和死亡率都很高，癥狀與貓泛白細胞減少癥相似。而MVC的致病性迄今尚未明確，雖然某些犬群的抗體陽(yáng)性率很高(達70%)。 本病雖發(fā)現時(shí)間不長(cháng)，但在歐、美等一些商業(yè)性飼犬場(chǎng)，相繼有流行和造成幼犬群損失的報道。除上述最早報道的兩個(gè)國家外，已相繼在美國、英國、西德和法國發(fā)現，當前已成為犬的一種重要傳染病，我國亦有本病的暴發(fā)流行，并已分離獲得多株病毒。研究報道日趨增多，并發(fā)現它在抗原性上與貓泛白細胞減少癥病毒有密切關(guān)系。 Rhode(1985)Reed(1988)分別克隆了犬細小病毒的衣殼蛋白基因和全基因組，并測定了核苷酸序列，基因組全長(cháng)5233nt。
1.形態(tài)和理化特性 CPV具有本屬病毒的典型形態(tài)和結構，糞便中負染的病毒顆粒外觀(guān)呈圓形或六邊形，直徑約20nm。核酸由單股DNA組成。其對外界因素的抵抗力與本屬其它病毒相似。
2.血凝性本病毒血凝特性較強，不僅能凝集豬的紅細胞，而且能凝集恒河猴的紅細胞(都要求在4℃溫度下)。這一特性可作為病毒鑒定的參考指標。
3.培養 CPV能在多種不同類(lèi)型的細胞內增殖，此點(diǎn)與貓泛白細胞減少癥和犬極小病毒不同。能在原代、次代貓胎腎細胞，犬胎的腎、脾、胸腺和腸管細胞，水貂肺細胞系(CCL64)，浣熊的唾液腺細胞以及牛胎脾細胞內增殖和傳代。近年常用MDCK和F81等傳代細胞分離培養病毒。CPV增殖后可引起F81細胞脫落、崩解和破碎等明顯的細胞病變。病毒雖能在MDCK細胞內良好增殖，但無(wú)明顯細胞病變。有時(shí)出現細胞圓縮，并常形成核內包涵體。為查明是否有病毒增殖，最好是取接種后3～5天的細胞單層作免疫熒光抗體染色，當有病毒增殖時(shí)，細胞核發(fā)出明顯的熒光；也可取培養液與豬或恒河猴紅細胞作凝集試驗，凝集陽(yáng)性表明有病毒增殖，但不能肯定是CPV。和本屬其它病毒對培養細胞的要求相同，必須在種入細胞后不久或同時(shí)接種病毒，才能達到增殖的目的。在感染的細胞核內能檢出包涵體。
4.致病性 就目前所知，CPV只感染犬，具有高度的接觸傳染性，各種年齡的犬都能感染，但成年犬一般只出現感染后的免疫反應，常無(wú)可見(jiàn)臨床癥狀，有時(shí)可能出現一過(guò)性的白細胞減少。但近來(lái)也常發(fā)現成年犬發(fā)生嚴重腸炎并死亡的嚴重病例。吮乳幼犬由于可能從母體獲得抗體，所以也較少發(fā)病。斷奶后的幼齡犬最為易感(尤其12周齡以下的)。嚴重流行時(shí)，可在幼犬群中迅速傳播。臨床表現體溫升高，精神沉郁，脫水，嘔吐，排出粘液狀或帶血的稀便(出血性腸炎)。1歲以?xún)鹊挠兹�，還常發(fā)生心肌炎，8周齡以?xún)扔兹乃劳雎矢哌_70%，1歲犬也達30%。犬感染CPV時(shí)，經(jīng)常首先看到心肌炎綜合癥，3～10周齡的幼犬突然死亡，死前常無(wú)臨床癥狀，多數病例在應激興奮期后死亡。耐過(guò)幼犬可能發(fā)生心肌損傷和心力衰竭，以不耐運動(dòng)為特征。組織學(xué)病變?yōu)閺浡苑腔撔孕募⊙�。病畜白細胞數可減少90%(由正常犬的每ml12萬(wàn)個(gè)減至每ml千余個(gè))，這時(shí)可出現很高的死亡率，尤其發(fā)生在9～12周齡的幼犬。于發(fā)病后5天不死亡的病犬，�？芍饾u康復。本病發(fā)病率和死亡率的變動(dòng)范圍都很大，前者從50%～100%，后者從0%～50%。病理變化以空腸和回腸的腸炎變化最明顯，粘膜發(fā)生壞死，腸內空虛或有少量淡黃帶血的粘液。腸系膜淋巴結腫大，切面點(diǎn)狀出血。作組織學(xué)檢查時(shí)，可于腸腺上皮細胞內發(fā)現核內包涵體。 因在疾病過(guò)程中發(fā)生病毒血癥，CPV隨糞便、尿、唾液和嘔吐物大量排出于外界。健康易感犬直接接觸病犬、攝入污染的食物和飲水或接觸污染的食具、墊草等而遭受感染。
5.免疫 病犬康復后能獲得堅強的免疫力。由母體初乳傳給幼犬的被動(dòng)免疫可持續4～5周。仔犬斷奶后即應進(jìn)行疫苗接種。 在預防上最早使用的是福爾馬林滅活的貓泛白細胞減少癥疫苗，也曾少量試用過(guò)貓泛白細胞減少癥弱毒疫苗。隨后又相繼研究出了CPV滅活疫苗和弱毒疫苗。據1980年Lenghaus等的研究資料，雖然CPV和FPV之間具有共同抗原組分，能發(fā)生交叉血清學(xué)反應，但兩者又各有其特性。兩種病毒抗血清的交叉中和試驗結果(血清稀釋法)是：抗CPV血清對CPV的中和效價(jià)為1∶4000，而對FPV則為1∶1000；抗FPV血清對FPV的中和效價(jià)為1∶32000，而對CPV則為1∶2000。另?yè)?979年Appel等的動(dòng)物免疫和攻毒試驗結果，也看到了兩種病毒抗原間的明顯差別：用CPV疫苗免疫的犬，攻毒前血凝抑制抗體價(jià)為1∶3200～6400，用CPV強毒攻毒擊后，抗體效價(jià)基本未動(dòng)；而用貓泛白細胞減少癥疫苗免疫的犬，攻毒前血凝抑制抗體效價(jià)為1∶160～320，用CPV強毒攻擊后，抗體效價(jià)激增到1∶3200～6400。上述兩項試驗都表明這兩種病毒抗原雖有共同組分，但又有自己的特異成分，因此無(wú)論疫苗制造和特異性診斷方法都以應用CPV為宜。 Lope等(1992)在昆蟲(chóng)桿狀病毒表達系統中表達了CPV的VP2蛋白，表達的VP2蛋白可自我裝配成空衣殼。10ug表達蛋白與免疫佐劑一起可使犬產(chǎn)生良好的免疫反應。Langeveld等(1994)合成的位于VP2氨基端21個(gè)氨基酸內有部分重疊的兩段多肽，分別免疫犬不但都能產(chǎn)生免疫保護反應，還可用針對第二個(gè)多肽3～10個(gè)氨基酸的單克隆抗體可以區別疫苗接種和自然感染的犬。
6.診斷 在熟悉本病流行特點(diǎn)和主要臨床癥狀后，尤其發(fā)生在幼犬的腹瀉和出血性腸炎，并伴發(fā)白細胞顯著(zhù)減少的傳染性疾病，即應聯(lián)想到本病。在有電鏡的條件下，快速的診斷方法是采取患病犬糞便，直接或加等量PBS后，混勻，以3000r/min離心15分鐘，取上清液加等量氯仿，振蕩10分鐘，再經(jīng)同樣上述離心處理，吸取上清液，以2%磷鎢酸(pH62)進(jìn)行負染后鏡檢�？梢�(jiàn)大量直徑約20nm圓形和六邊形病毒粒子。如能進(jìn)行免疫電鏡檢查則更佳(見(jiàn)圖37-4)。〖KH4〗〖JZ〗〖HT5”SS〗圖37-4 犬細小病毒的〖WB〗負染標本(橫杠=100nm)〖DW〗——自賈補年〖HT5SS〗 也可取發(fā)病早期的病犬糞便直接進(jìn)行血凝試驗。血凝價(jià)�？筛哌_2000～4000倍以上。發(fā)病后期糞便，由于腸粘膜分抗體，血凝性下降或消失，但卻經(jīng)常出現血凝抑制作用。此時(shí)進(jìn)行電鏡負染標本檢查，�？砂l(fā)現大塊凝集的病毒粒子，猶如免疫電鏡所見(jiàn)。 分離病毒時(shí)，為了去除糞便中的細菌，除加入高濃度的抗生素外，有條件時(shí)可對上述普通離心處理的濾液，再以10000r/min離心30分鐘。犬胎腎和貓胎腎原代細胞、F８１細胞糸均可用于CPV的分離。最簡(jiǎn)便的病毒鑒定方法是接種后3～5天應用免疫熒光抗體檢測細胞中的病毒或測定培養液的血凝性。 應用陽(yáng)性血清，進(jìn)行血凝抑制試驗，也是鑒定病毒的有效方法。血凝抑制試驗也可作為回顧性血清學(xué)診斷法或抗體調查手段。血清先經(jīng)56℃30分鐘滅活，并以1/10容量的50%豬紅細胞作預吸附處理。離心后，將上清液用含01%牛血清白蛋白的PBS作連續倍倍稀釋?zhuān)S后向各稀釋度凹孔加入等量血凝抗原(含4個(gè)單位血凝素)，混勻，室溫下經(jīng)1小時(shí)，加入等量的1%豬紅細胞懸液，混勻，在4℃下放置2～4小時(shí)或過(guò)夜后判定。病程前、后期血清的血凝抑制效價(jià)，相差超過(guò)4倍以上的為陽(yáng)性。〖BT4〗(附) 犬極小病毒(Minutovirusofcanine) 犬極小病毒是1967年Binn等從健康犬糞便中分出來(lái)的第一種犬細小DNA病毒。其致病性目前尚不清楚。它具有本屬病毒所共有的形態(tài)和理化學(xué)特征。直徑約20～21nm。它僅能在5℃下凝集恒河猴和非洲綠猴的紅細胞。交叉血凝抑制試驗表明，它與細小病毒屬的某些成員(H1、MMV、RV、FPV、PPV、RTV、TVX和LuⅢ等)無(wú)共同抗原組分。病毒的細胞感染范圍很窄，僅能在犬的一種上皮細胞系內增殖，并形成大型核內包涵體。 至于MVC與CPV的關(guān)系，有人認為兩者是同一種病毒的不同病原性的毒株，但也有人根據兩者不同的培養特性和不一致的血清學(xué)關(guān)系，認為兩者是不同種的病毒。
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