1 基本原理
細菌總數是指水樣在一定條件下培養后所得1ml水樣所含菌落的總數。
總大腸菌群系指一群在37℃培養24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。該菌群主要來(lái)源于人畜糞便,具有指示菌的一般特征,故以此作為糞便污染指標評價(jià)飲水的衛生質(zhì)量。水中總大腸菌群數系以100ml水樣中污染的總大腸菌群最可能數(MPN)表示。
按國家飲用水衛生標準規定,1毫升自來(lái)水中雜菌數不得超過(guò)100個(gè),大腸菌群數1000毫升水中不得超過(guò)3個(gè)才算合格。
2 材料
營(yíng)養瓊脂、乳糖膽鹽發(fā)酵培養基、酒精、棉簽、培養皿、無(wú)菌廣口瓶
3 方法
3.1 采樣(自來(lái)水):先將水龍頭打開(kāi),放水1~2分鐘后,關(guān)閉水龍頭。用酒精棉球灼燒龍頭三分鐘滅菌,再開(kāi)放水龍頭使水流5分鐘,用無(wú)菌瓶收集水樣。
3.2 細菌總數檢查:
3.2.1 用滅菌吸管吸取1ml水樣,注入滅菌培養皿中,共做2個(gè)。
3.2.2 分別傾注約15ml已熔化冷卻至45℃左右的營(yíng)養瓊脂,混勻后置37℃培養24小時(shí)進(jìn)行菌落計數,同時(shí)應作一空白對照。兩個(gè)培養皿的平均菌落數即為水樣1ml中的細菌總數。
3.3 大腸菌群數檢查:
乳糖發(fā)酵試驗→分離培養→證實(shí)試驗→報告
3.3.1 乳糖發(fā)酵試驗:
自來(lái)水的接種方法:在2個(gè)裝有50ml三倍料乳糖膽鹽發(fā)酵液的三角瓶中,各加入100ml水樣;在10支裝有5ml同樣發(fā)酵的試管中,各加入10ml水樣,混勻。將上述各發(fā)酵管(瓶)置36±1℃溫箱內,培養24±2小時(shí),觀(guān)察結果。如所有發(fā)酵管都不產(chǎn)氣,則可報告為大腸菌群陰性;如有產(chǎn)氣者,則按下列程序進(jìn)行。
3.3.2 分離培養:將產(chǎn)氣的發(fā)酵管用接種環(huán)分別以劃線(xiàn)法轉接于伊紅美蘭瓊脂平板上,置36±1℃溫箱內,培養18~24小時(shí),取出觀(guān)察菌落形態(tài)。
3.3.3 證實(shí)試驗:在每個(gè)平板上,挑取可疑菌落(紫黑色或淡紫紅色,有或略有或沒(méi)有金屬光澤的菌落)1~2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色,同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管,置36±1℃培養24±2小時(shí)進(jìn)行復發(fā)酵試驗,觀(guān)察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的芽孢桿菌即可報告為大腸菌群陽(yáng)性。
4 報告
每毫升自來(lái)水所含菌落數以個(gè)/mL表示;根據證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數,查大腸菌群檢索表,報告每升水樣的大腸菌群的最可能數。
注:本文參照GB5750-85《生活飲用水標準檢驗方法》
上一篇:芽孢總數的測定
下一篇:食品接觸面的微生物檢驗