1、 設備和儀器
（1） 超凈工作臺
（2） 冰箱（4℃）
（3） 恒溫箱：30±1℃、36±1℃、55±1℃
（4） 顯微鏡：帶油鏡頭
（5） 天平
（6） 接種環(huán)
（7） 滅菌刀或剪刀、滅菌鑷子、試管、吸管、平皿
（8） 白瓷搪缸
（9） PH電位計
（10） 酒精燈
2、 培養基和試劑
（1） 革蘭氏染色液
（2） 庖肉培養基
（3） 溴甲酚紫葡萄糖肉湯
（4） 酸性肉湯
（5） 麥芽浸膏湯
（6） 錳鹽營(yíng)養瓊脂
（7） 血瓊脂
（8） 卵黃瓊脂
（9） 95%酒精溶液
3、 檢驗步驟
（1） 按取樣步驟取樣。
（2） 保溫：將樣品按照保溫試驗要求進(jìn)行保溫，保溫過(guò)程中，每天檢查如有脹包或泄露等現象，立即取出開(kāi)包檢測。
（3） 開(kāi)包裝
取保溫過(guò)的樣品，冷卻到室溫后，開(kāi)包檢查。
（4） PH值測定：
對每一包的樣品測PH值，看與標準樣是否有顯著(zhù)的差異。
（5） 涂片染色鏡檢
涂片
對PH值檢查結果認為可疑的進(jìn)行涂片染色鏡檢。用接種環(huán)挑取樣品涂于載玻片上，待干后用火焰固定。
染色鏡檢
用革蘭氏染色法染色，鏡檢，至少觀(guān)察5個(gè)視野，記錄細菌的染色反應，形態(tài)特征以及每個(gè)視野的細菌。與同批的正常樣品進(jìn)行對比，判斷是否有明顯的微生物增殖現象。
（6） 接種培養
保溫期間出現的脹包、酸包，或開(kāi)包檢查發(fā)現PH值、感官質(zhì)量異常，進(jìn)一步鏡檢發(fā)現有異常數量細菌的樣品，均勻及時(shí)進(jìn)行微生物接種培養。
對需要接種培養的樣品用滅菌移液管移出1ml內容物，分別接種培養，接種量為培養基的十分之一。所要求的55℃培養基，在接種前應在55℃水浴鍋中預熱至該溫度，接種后立即放入55℃溫箱培養。
低酸性產(chǎn)品接種培養、管數及培養條件見(jiàn)表1
|
培養基 |
管數 |
培養條件 |
時(shí)間（h） |
|
皰肉培養基 |
2 |
36±1℃（厭氧） |
96-120 |
|
皰肉培養基 |
2 |
55±1℃（厭氧） |
24 72 |
|
溴甲酚紫葡萄糖肉湯（帶導管） |
2 |
36±1℃（需氧） |
96-120 |
|
溴甲酚紫葡萄糖肉湯（帶導管） |
2 |
55±1℃（需氧） |
24 72 |
酸性產(chǎn)品接種培養基、管數及培養條件見(jiàn)表
|
培養基 |
管數 |
培養條件 |
時(shí)間（h） |
|
酸性肉湯 |
2 |
55±1℃（需氧） |
48 |
|
酸性肉湯 |
2 |
30±1℃（需氧） |
96 |
|
麥芽浸膏湯 |
2 |
30±1℃（需氧） |
96 |
（7） 微生物 培養檢驗程序判定
（等同于6。11。1）
對有微生物生長(cháng)的酸性肉湯和麥芽浸膏湯管進(jìn)行觀(guān)察，并涂片染色鏡檢，按所發(fā)現的微生物類(lèi)型判定。
（8） 樣品密封性檢驗
對確定有微生物繁殖的樣罐均進(jìn)行密封性檢驗以判定該樣品是否泄露。
4、結果判定
（1） 該批產(chǎn)品抽取樣品經(jīng)保溫試驗未脹、酸包或泄露；保溫后開(kāi)包，經(jīng)感官檢查、PH值測定或涂片鏡檢或接種培養，確證無(wú)微生物繁殖現象，則為商業(yè)無(wú)菌。
（2） 該批產(chǎn)品抽取樣品經(jīng)保溫試驗有一包以上發(fā)生脹、酸包或泄露；或保溫后開(kāi)包，經(jīng)感官檢查、PH值測定或涂片鏡檢或接種培養，確證有微生物繁殖現象，則為非商業(yè)無(wú)菌。
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